操作步骤:
1. 5ml 离心管 12000rpm 离心 1min 收集细胞。
2. 真空吸干上清,0.3ml 的 Solution 1 重悬沉淀,轻轻地震荡或上下混匀。
3. 0.3ml 的 Solution 2 轻轻混匀,室温孵育 5min 。注意:悬浮的沉淀应该从浑浊到几乎半透明。
4. 缓慢加入 0.3ml KAC ,加入过程中轻轻混匀,冰上放置 5-10min。
5. 12000rpm 离心 10min。
6. 轻轻将上清转移到含有 0. 8ml 异丙醇的离心管,不要吸到白色沉淀,颠倒混匀,冰上孵育 5-10min。
7. 室温 12000rpm 离心 15 min。
8. 小心弃去上清,不要浮起沉淀,加入 0.5ml Wash Buffer ,颠倒离心管数次清洗沉淀。
9. 室温 12000rpm 离心 5 min 。重复 8 和 9。
10 . 轻轻吸弃上清,室温 5-10 min 干燥沉淀,不要过分干燥。注意: 勿使用真空离心选装蒸发仪去干燥 DNA。
11 . 40μl End Solution重新溶解DNA沉淀,为避免剪切,勿机械重悬DNA ,让溶液顺管子轻轻流下溶解DNA。
注意事项:
1. 不推荐纯化的杆粒 DNA 存在-20℃ , 因为反复冻融会剪切 DNA。
2. 分析重组杆粒 DNA(PCR 鉴定重组杆粒 DNA)或转染昆虫细胞。
有效期: 12个月有效。