考马斯亮蓝R-250,化学名称为Coomassie brilliant blue R-250,是一种三苯甲烷类染料,CAS号为6104-59-2,分子式为C₄₅H₄₄N₃NaO₇S₂,分子量约为826。其外观通常为蓝黑色或暗紫棕色粉末。它主要通过范德瓦尔键及静电相互作用与蛋白质的碱性氨基酸(如精氨酸、赖氨酸和组氨酸)残基结合,形成蓝色复合物。该染料是生物化学实验室中常用的蛋白质染色剂,尤其适用于SDS-PAGE电泳后凝胶中微量蛋白质的染色,其染色灵敏度比氨基黑高5倍,检测下限可达0.1 µg蛋白。在较宽的浓度范围内(约15-20µg),扫描峰面积与蛋白质含量呈线性关系,适用于半定量分析;但需注意,蛋白质浓度过高时不符合比尔定律,影响定量准确性。除了凝胶染色,它也用于Bradford法蛋白质定量。标准的染色方法通常使用含0.1%-0.25%考马斯亮蓝R-250的酸性甲醇溶液(如40-50%甲醇,10%醋酸),染色后需经脱色步骤以降低背景。操作时应注意安全,该物质对皮肤、眼睛和呼吸道有刺激性,需穿戴实验服和手套。
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