RiboGreen RNA荧光定量染料

产品简介

    RiboGreen是一种超灵敏的荧光核酸染料，用于溶液内RNA的定量检测。在大量分子生物学实验过程中对微量RNA的检测和定量特别重要，这些过程包括：体外转录RNA产量的测定，以及在进行Northern Blot、S1核酸酶实验、RNase保护实验、cDNA文库制备、逆转录PCR和差异显示PCR前对RNA浓度的测定。

核酸浓度测定最常见的方法是测量260nm波长处的吸光值（A260），然而，基于吸光值检测法主要的缺点在于蛋白和游离核苷酸对光信号具有较大的干扰；以及检测灵敏度较低（A260=0.1相当于溶液中4µg/mL的RNA）；而应用灵敏的荧光核酸染料能避免很多由于这些因素引起的问题。

RiboGreen能定量浓度低至1ng/mL的RNA，通过荧光酶标仪、标准的荧光光度计或滤光荧光计来测量。此探针与RNA结合后的最大激发波长~500nm，最大发射波长~525nm。用荧光酶标仪读数，200µL的反应体系可检测低至200pg RNA，这一灵敏度比基于溴化乙锭的荧光分析法高200倍，比基于紫外吸收峰的分析法高1000倍。使用两个染料浓度，RiboGreen可测量的RNA浓度线性范围可达3个数量级，从1ng/mL到1µg/mL RNA（见图 1）。高宽度实验(High-rangeassay)能定量(20ng/m L～500ng/mL)的RNA，低宽度实验(Low-rangeassay)能定量(1ng/mL～50ng/mL)的RNA，即使体系内存在核酸制备物中常见的几种杂质(包括:核苷酸、盐类、尿素、乙醇、氯仿、表面活性剂、蛋白和琼脂糖)，也能维持这一线性关系。另外，RiboGreen也会结合DNA，先用DNase预处理混合样品，再用RiboGreen进行RNA选择性的定量分析。