锰过氧化物酶(MnP)测试盒

商品属性：

商品介绍：

锰过氧化物酶（EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属

于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、

DTT，多环芳烃等。 测定原理

锰过氧化物酶在 Mn

2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在 465nm 有特征

吸收峰。 自备实验用品及仪器

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
检测原理：

Mn²⁺氧化启动酶促循环：MnP 在过氧化氢存在条件下，将 Mn²⁺氧化生成 Mn³⁺；Mn³⁺‑有机酸复合物作为氧化中间体。

Mn³⁺介导底物氧化显色：Mn³⁺氧化显色底物（如 2,6‑二甲氧基苯酚），底物氧化后生成有色产物。

动态吸光度监测：469 nm 检测有色产物吸光度上升速率。

酶活计算：每分钟底物氧化引起的吸光变化量定义 MnP 活力单位。
样本前处理方法：

‌一、组织样本‌

离体后立即液氮速冻，取0.1g新鲜组织按1:10比例加入预冷提取液。

冰浴条件下充分匀浆，超声破碎30次（功率20%，超声3s/间隔10s）。

8000g 4℃离心10min，取澄清上清置于冰上待测。

‌二、细胞/细菌样本‌

收集500万~1000万细胞，弃去培养基后加入1mL预冷提取液。

冰浴超声破碎，8000g 4℃离心10min，取上清待测。

三、液体样本‌

血清/血浆样本按1:10比例加入提取液，沸水浴振荡提取10min。

10000g常温离心10min，取上清冷却后待测。

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测定操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定