糖原合成酶(GCS)测试盒
产品介绍:
GCS(EC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP,以α-1,4-糖苷键相连延长糖链,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰岛素作用的主要靶酶,对糖代谢的调节和血糖稳态的维持具有重要作用。
测定原理:
GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映GCS活性。
需自备的仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
产品名称 | 糖原合成酶(GCS)测试盒 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 |
检测方法 | 微量法、紫外分光光度法 |
分类 | 糖原系列 |
货号 | YSH3409 |
检测原理:
核心反应原理:糖原链延伸‑偶联检测:糖原合成酶以 UDP‑葡萄糖为葡萄糖供体,将葡萄糖残基添加至原有糖原引物链,释放 UDP;UDP 再经偶联反应生成 NADH。
靶标反应路径:UDP‑Glc + (糖原)ₙ \(\xrightarrow{GCS}\) (糖原)ₙ₊₁ + UDP;UDP 经丙酮酸激酶‑LDH 偶联产生 NADH 信号。
吸光信号来源:NADH 在 340 nm 吸光度上升;上升速率等于糖原合成速度。
定量计算原理:测定单位时间 340nm 吸光增量;换算出糖原合成酶催化活性。
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操作步骤:
操作仪器预热:将可见分光光度计预热30min,调节波长至540nm,用蒸馏水调零标准曲线绘制:
取6支具塞刻度试管,分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液(10mg/mL)
用蒸馏水补至1.0mL,再加入2.0mL显色工作液,沸水浴5min
立即用流水冷却至室温,定容至25mL,摇匀后测定540nm处吸光值
以葡萄糖浓度(mg/mL)为横坐标,吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定:
试剂名称(μL) 空白管 测定管
提取液/样本 100 100
试剂一 700 700
试剂二 100 100
混匀后37℃水浴30min,立即加入2.0mL显色工作液,沸水浴5min
流水冷却至室温,定容至25mL,摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定
关键字: 糖原合成酶;GCS;测试盒;
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