细菌基因组DNA提取试剂盒

产品简介

细菌基因组DNA提取试剂盒本试剂盒用于从各类革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌菌体中提取基因组 DNA。采用硅胶柱吸附纯化原理，经过裂解、去除蛋白杂质、核酸结合、洗涤、洗脱步骤获得高纯度细菌基因组 DNA。所得 DNA 可用于 PCR 扩增、酶切、测序、建库等分子生物学体外实验。仅供科研实验室使用，不用于临床诊断。

试剂盒组分

1. 细菌裂解液：含裂解盐、去污剂

2. 蛋白去除液：沉淀蛋白与多糖杂质

3. DNA 结合液：调节结合环境，促使 DNA 结合硅胶柱膜

4. 洗涤液 1：去除蛋白、色素残留

5. 洗涤液 2：去除盐离子、小分子杂质（含乙醇）

6. 洗脱缓冲液：pH8.0‑8.5 Tris‑EDTA 缓冲液

7. DNA 吸附柱、收集管

注意：洗涤液 2 使用前需按要求加入无水乙醇。

储存条件

- 全部组分室温（15‑25℃）避光保存，有效期 12 个月；裂解液如有盐析沉淀，37℃水浴溶解后可继续使用。

- 吸附柱干燥存放，不可低温冷冻。

操作步骤

1. 菌体收集：取 1‑5 mL 细菌过夜培养液，离心收集菌体，弃尽上清。

2. 菌体裂解：加入裂解液充分重悬菌体，55‑65℃水浴裂解 10‑30 min，期间颠倒混匀。

3. 杂质沉淀：加入蛋白去除液，充分混匀，高速离心，取上清。

4. DNA 结合：上清中加入 DNA 结合液，混匀后全部转移至吸附柱，离心，弃流出液。

5. 洗涤：加入洗涤液 1 离心弃废液；再加洗涤液 2 离心弃废液；空柱离心 2‑3 min 彻底除去残留乙醇。

6. 洗脱：将吸附柱转移至新离心管，向柱膜中央加入预热洗脱缓冲液，室温静置 2‑5 min，离心洗脱得到基因组 DNA。

质量指标

- 提取 DNA OD260/280：1.7‑1.9；OD260/230＞1.8

- 产物无明显 RNA 残留，可直接用于 PCR 等酶促反应。

注意事项

1. 操作全程佩戴手套，防止核酸酶污染；耗材尽量无 DNase。

2. 洗涤液 2 务必添加足量无水乙醇，否则 DNA 洗脱回收率大幅下降。

3. 空柱离心步骤必须充分，残留乙醇会抑制后续酶反应。

4. 洗脱体积可按需调整，小洗脱体积获得高浓度 DNA。

5. 产物 DNA‑20℃分装保存，避免反复冻融。

6. 仅用于体外科研实验。

公司正在出售的产品：

测定操作步骤：

标准曲线绘制：

取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。

每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样本检测：

取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。

微量酶标仪法操作步骤

加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。

反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。

终止：每孔加入50μL终止液。

读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。