产品简介
PCMV-C-FLAG 为真核表达质粒载体;CMV 强启动子驱动目的基因表达,C 端携带 FLAG 标签序列,可用于哺乳动物细胞内目的蛋白过表达,通过 FLAG 标签开展 WB、免疫共沉淀、免疫荧光等检测实验。仅用于体外科研,不可用于临床、基因治疗、人体实验。
技术参数
1. 启动子:CMV 立即早期启动子
2. 标签:C‑末端 FLAG 标签(DYKDDDDK)
3. 复制原点:pUC ori(大肠杆菌扩增)
4. 原核抗性:氨苄青霉素抗性(Amp⁺)
5. 真核筛选标记:无(载体基础骨架)
6. 载体形式:冻干质粒 DNA / 质粒溶液
7. 测序通用引物:CMV‑Forward,BGH‑Reverse
储存条件
- 干粉质粒:‑20℃密封避光干燥保存,有效期 24 个月
- 质粒水溶液:‑20℃分装保存,避免反复冻融;4℃短期不超过 14 天
使用说明
1. 质粒扩增:转化 DH5α 等大肠杆菌感受态,LB‑Amp 抗性平板,37℃培养;液体摇菌选用含氨苄的 LB 培养基。
2. 目的基因克隆:将目的基因去除终止密码子,插入多克隆位点,实现蛋白 C 端融合 FLAG 标签。
3. 细胞转染:质粒纯化后,使用转染试剂转染哺乳动物细胞,CMV 启动子介导靶蛋白表达,C 端带上 FLAG 标签。
4. 检测:使用 FLAG 抗体开展 Western Blot、IP、IF 实验。
使用注意事项
1. 扩增细菌必须加氨苄青霉素筛选,否则质粒容易丢失。
2. 目的基因插入时,阅读框必须匹配,保证 FLAG 标签正常翻译;若保留基因本身终止子,会造成 FLAG 标签不表达。
3. 质粒避免反复冻融,防止 DNA 降解。
4. 仅限实验室体外分子生物学研究,严禁用于体内基因递送、临床。
公司正在出售的产品:
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