产品简介
SDS-PAGE凝胶配制试剂盒本试剂盒用于配制十二烷基硫酸钠‑聚丙烯酰胺凝胶(SDS‑PAGE),用于蛋白电泳分离,可制备浓缩胶与分离胶,适用于蛋白分子量检测、蛋白纯度鉴定等体外科研实验。仅供科研使用,不可用于临床诊断、人体相关检测。
试剂盒组分
1. 30% 丙烯酰胺‑甲叉双丙烯酰胺储存液(Acr‑Bis)
2. 1.5 M Tris‑HCl(pH 8.8,分离胶缓冲液)
3. 0.5 M Tris‑HCl(pH 6.8,浓缩胶缓冲液)
4. 10% SDS 溶液
5. 10% 过硫酸铵(APS)
6. TEMED(四甲基乙二胺)
注:部分包装 APS 为干粉,需临用前配制。
储存条件
1. 30% Acr‑Bis、1.5M Tris‑HCl、0.5M Tris‑HCl、10% SDS:2‑8℃避光保存。
2. 10% APS:2‑8℃短期保存;长期分装‑20℃避光,现配现用效果最佳。
3. TEMED:2‑8℃密封避光保存,易氧化。
4. 试剂盒整体有效期:12 个月;APS 溶液开封后建议 1 个月内用完。
操作步骤
1. 凝胶配制(以一块胶为例)
根据目标蛋白分子量选择分离胶浓度:
- 8%:适合 80‑140 kDa
- 10%:适合 30‑80 kDa
- 12%:适合 20‑30 kDa
- 15%:适合 10‑20 kDa
分离胶配制(10mL 10% 示例)
30% Acr‑Bis 3.3 mL;1.5M Tris‑HCl (pH8.8) 2.5 mL;10% SDS 0.1 mL;纯水 4.0 mL;10% APS 0.1 mL;TEMED 0.004 mL。混匀后灌入玻璃板,上层加水或者异丙醇封层,室温静置聚合 30‑60 min。
浓缩胶配制(4mL 5% 示例)
30% Acr‑Bis 0.67 mL;0.5M Tris‑HCl (pH6.8) 1.0 mL;10% SDS 0.04 mL;纯水 2.26 mL;10% APS 0.04 mL;TEMED 0.004 mL。倒掉分离胶上层封层液体,灌入浓缩胶,插入梳子,室温静置聚合 20‑40 min。
2. 电泳
拔出梳子,组装电泳槽,加入电泳缓冲液,上样后进行 SDS‑PAGE 电泳。
注意事项
1. 丙烯酰胺单体具有神经毒性,操作佩戴手套,避免皮肤接触;聚合完成后凝胶基本无毒。
2. TEMED、APS 为促凝剂,加入后凝胶会逐步聚合,配胶操作要迅速。
3. APS 氧化失效会导致凝胶无法凝固,建议定期更换。
4. 所有试剂避免直接接触皮肤、眼睛,如不慎接触大量清水冲洗。
5. 仅用于体外科研实验。
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