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易错PCR(Error-Prone PCR)是利用天然Taq DNA聚合酶不具有3′→5′校对功能的特性,在一定条件下能够按较高的机率随机引入突变而设计。如果有适当的突变选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体,用于人工诱变。但是易错PCR在操作中最大的问题是最佳PCR循环数的摸索,循环次数太多或太少,都得不到成形的突变DNA条带,影响后续的DNA回收和克隆步骤。为克服此缺点,本公司开发了染料法实时易错PCR产品,它具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便。
2. 可以实时监控PCR的进程,用户可以不需要任何摸索就能在最佳时间(荧光信号刚进入平台期)停止PCR,立即进行电泳,回收到突变DNA。
3. 配方经过精心优化,突变率稳定,用本试剂盒进行一次标准的易错PCR扩增实验一般会得到6-7个突变(对1000 bp的片段而言)。进行定向突变时每个基因有2-6个突变为最佳范围。
4. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在PCR引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
5. 可用于连续易错PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
6. 只适用于扩增1 kb以下的产物,对于1 kb以上的产物,建议分段扩增。
7. 本产品足够100次30 mL体系的染料法实时易错PCR反应。
8. 本产品只能用于科研。
北京天净沙基因科技有限公司
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