银染清除剂

银染清除剂
产品及特点银染是目前最灵敏的非同位素蛋白质和核酸染色技术，对银染后的条带进行原 位酶切（in-gel digestion）和后续 MS 分析是蛋白组学研究的重要手段。大量研 究表明如果预先对银染条带进行去除银粒子的处理，则原位酶切更加有效，MS 灵 敏度更高。目前最常用的脱银粒子清除方法（如铁氰酸钾/硫代硫酸钠法、硫酸铜/ 硫代硫酸钠法）的主要缺点是引入的金属离子会影响后续反应、有的成分还有毒性 (如铁氰酸钾)、工作液极不稳定。为克服这些缺点，本公司开发了无毒环保的新型 银粒子清除剂，它具有下列特点：

1. 高效，5 分钟处理即可清除 PAGE 胶中银染留下的银粒子。

2. 成分不含金属离子，跟原位酶切和质谱分析（包括 MALDI-TOEMS）等后续 反应高度兼容，脱银后 PAGE 胶还可以再次银染或考染。

3. 成分无毒环保，保障研究人员和环境的安全。

4. 既可用于蛋白质银染后的脱银，也可用于核酸银染后的脱银。

5. 即开即用，使用非常方便，不需要配制各种溶液。
银染清除剂
规格及成分 成 份 编 号 30 次纸盒包装
银染清除剂溶液 A 100603A 100 mL
银染清除剂溶液 B 100603B 1 mL 棕色管
使用手册 1 份

银染清除剂运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。

使用方法

1. 银染后，切下含所需蛋白条带的 PAGE 胶条用自备的去离子水摇晃浸泡 2 次， 每次 5 分钟以去除电泳缓冲液。注意：不要使用整块 PAGE 胶。

2. 用干净镊子将胶条转移到 5-10 mL 的容器中（如 5 mL 的塑料管或 10 mL 的 细菌培养管），加入 1 mL 溶液 A，摇晃 5 分钟，去掉溶液 A。

3. 再加入 1 mL 溶液 A，摇晃 5 分钟，去掉溶液 A。

4. 加入 1mL 溶液 B 工作液，摇晃直到颜色脱去（一般不到 20 分钟）。溶液 B 工作液配制方法：将 33uL 溶液 B 加入到 1mL 的溶液 A 中混合均应，现用 现配。

5. 取出脱色后的胶条，在去离子水中摇晃浸泡二次，每次 5 分钟。

6. 胶条可以直接用于后续的再染色或质谱分析（需要先甲酸酸化和脱水处理）。 附：蛋白胶条质谱分析流程（仅仅供参考，本试剂盒不提供相关试剂）

1. 用 1%甲酸浸泡脱银后的胶条 2 次，每次 5 分钟。

2. 用水-乙腈-甲酸混合液（49.5:49.5:1）浸泡 5 分钟。

3. 用乙腈浸泡 5 分钟。真空干燥去除残留水分。

4. 将胶条置于含 8 ng/uL Trypsin 的 25 mM 碳酸铵溶液中浸泡 30 分钟。

5. 去除多余溶液，加入 20 uL 25 mM 碳酸铵溶液，37℃保温 8 小时。

6. 加 10 uL 10%甲酸终止反应。收集溶液（含有酶解的蛋白产物）。

7. 用水-乙腈-甲酸混合液（49.5:49.5:1）浸泡 10 分钟，收集溶液。

8. 用乙腈浸泡 10 分钟，收集溶液。汇集上面三步收集的溶液，真空干燥。

9. 将干燥的多肽溶解于水-乙腈-甲酸混合液（49.5:49.5:1）中，并 1:1 与 10mg/mL 的α-氰基-4-羟基肉桂酸溶液（α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid）混合，此溶液溶剂为水-乙腈-甲酸混合液（49.5:49.5:1），然后直接用 于 MALDI-TOFMS 分析。