使用碱性品红鉴定染色体上DNA的存在

2024/4/23 14:16:39 作者:云霄

DNA是主要的遗传物质,集中于染色体上。1924年孚尔根首先用席夫试剂(Schiff)作试验,鉴定了染色体上DNA的存在,故称为孚尔根染色法。孚尔根染色法的反应原理主要与席夫试剂的化学性质有关,此试剂的基本成分是碱性品红,偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸。

碱性品红

孚尔根染色原理

碱性品红原为桃红色,当与亚硫酸作用时还原,使醌型变为苯型,由桃红色变为无色透明的N-亚磺酸亚硫酸副品红碱,当它与醛基作用时,其分子式又恢复为醌型结构,呈现紫红色,利用1N HCl 、60℃下水解时,可将DNA分子中嘌呤碱基与去氧核糖之间的糖苷键打断,使嘌呤脱下,并使去氧核糖C-1位置释放醛基与席夫试剂反应显紫红色。细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应,因此利用孚尔根反应,可以鉴定DNA的存在。并广泛应用于核及染色体的研究中。

席夫试剂配制

称1g碱性品红于200ml煮沸的重蒸馏水中,5分钟后断电使其冷却至55~50℃,过滤到一个棕色的试剂瓶中,加入1N HCl  20ml,继续冷却至25℃,加入1g偏亚硫酸氢钠,摇动瓶子使其溶解。密闭瓶口,置黑暗低温处或冰箱内(4℃左右),18~24小时后检查,试剂如透明无色或呈浅黄色时即可使用,这就是Schiff试剂溶液。如有不同程度的红色未褪,可加入1g活性炭,强烈震荡一分钟,仍在低温下静置过夜,然后用滤纸过滤后使用。密封瓶口,包以黑纸,在5℃以下冰箱内可以保存半年。

其它应用

除去染色DNA,碱性品红在生物学制片中用途很广,可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁,又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中,长用来鉴别结核杆菌。

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