背景[1-3]
小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒是一种专门用于检测小鼠血清、血浆等样本中抗胰蛋白酶（AT）浓度的试剂盒。它基于酶联免疫吸附法（ELISA）的原理，通过固相抗体与样本中的AT特异性结合，再与酶标抗体形成复合物，经过洗涤和显色步骤后，通过测定吸光度（OD值）来计算样本中AT的浓度。
小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒的主要组成包括：
酶标包被板：用于承载固相抗体，通常是微孔板，每个孔都预先包被了抗胰蛋白酶的抗体。
标准品：用于绘制标准曲线，帮助计算样本中AT的浓度。
酶标试剂：即HRP标记的抗体，与样本中的AT结合后形成复合物。
洗涤液：用于洗涤酶标板，去除未结合的成分。
显色剂：与酶标抗体反应后产生颜色变化，用于定量检测AT的浓度。
终止液：用于停止显色反应，以便进行OD值的测定。
小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒
使用小鼠抗胰蛋白酶（AT）ELISA试剂盒进行实验时，需要按照以下步骤进行：
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。
小鼠抗胰蛋白酶（AT）ELISA试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，在生物医学研究、临床诊断等领域中得到了广泛应用。例如，可以用于评估小鼠的免疫功能、检测疫苗免疫后小鼠体内抗体的产生情况、评估药物的药理作用和疗效等。需要注意的是，在使用该试剂盒时，应仔细按照说明书进行操作，并注意样本的采集、保存和处理等细节问题，以保证实验结果的准确性和可靠性。
应用[4][5]
小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒可以用于胃液中α1-抗胰蛋白酶检测在胃癌诊断中的价值研究
通过对胃癌及高危患者胃液中α1-抗胰蛋白酶检测来探讨胃液中α1-抗胰蛋白酶检测在胃癌诊断中的价值,为未来应用于临床的胃癌筛查方法提供新的选择。方法:入选193例胃癌及胃癌高危患者的胃液,所有入选者行胃镜检查及组织病理学检查,应用小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒酶联免疫吸附法检测所有研究对象胃液中α1-抗胰蛋白酶浓度,然后根据胃镜及组织病理学检查结果为金标准将研究对象进行分组,胃癌组30例,消化性溃疡组62例(包括胃溃疡21例、十二指肠球部溃疡41例),胃炎组73例(包括慢性非萎缩性胃炎25例、慢性萎缩性胃炎48例),对照组来自于我院健康体检中心的健康体检者共28例。其中萎缩性胃炎组包括病理诊断为不典型增生和肠上皮化生者。比较各组胃液中α1-抗胰蛋白酶浓度高低,确定其用于胃癌诊断的最佳临界值,最后评价胃液中α1-抗胰蛋白酶检测用于胃癌诊断的价值大小。
小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒结果:胃癌组、消化性溃疡组、胃炎组和对照组在年龄、性别、幽门螺旋杆菌感染及胃癌家族史等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。胃癌组胃液PH值高于消化性溃疡组、胃炎组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组胃液中α1-抗胰蛋白酶浓度高于消化性溃疡组、胃炎组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。消化性溃疡组胃液中α1-抗胰蛋白酶浓度高于对照组和胃炎组,低于胃癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。胃炎组与对照组胃液中α1-抗胰蛋白酶浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。消化性溃疡组中胃溃疡组胃液中α1-抗胰蛋白酶浓度高于十二指肠球部溃疡组,差异有统计学意义(P<0.05)。胃炎组中慢性非萎缩性胃炎和萎缩性胃炎组胃液中α1-抗胰蛋白酶浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
消化性溃疡组和胃癌组中溃疡及肿瘤大小与小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒测得的胃液中α1-抗胰蛋白酶浓度呈正相关,相关系数r=0.745,P<0.05,结果有统计学意义。对胃液中α1-抗胰蛋白酶浓度检测在胃癌诊断中的价值进行ROC曲线分析,分析结果显示,ROC曲线下面积为0.973,95%可信区间为0.95-0.99,将约登指数最大的点1040.9ug/dl确定为最佳临界值。
参考文献
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[4]A smart capsule system of Gastric Occult Blood Detection[J].Feng Liu;;Ali Goodarzi;;Haifeng Wang;;Joanna Stasiak;;Jianbo Sun;;Yu Zhou;;Hongying Liu;;Panpan Qiao;;Xueli Wu;;Li Wang;;Yilu Ao;;Ziru Jia;;Xitian Pi.Bio-Medical Materials and Engineering,2014(1)
[5]申停停.胃液中α1-抗胰蛋白酶检测在胃癌诊断中的价值研究[D].青岛大学,2018.