Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）
M-MLV反转录酶(RNase缺失)
● 产品货号及规格：
● 产品简介：
M-MLV反转录酶(RNase H-)，是一种经过改造和优化的反转录酶。和普通的M-MLV反转录酶相比，缺失了Ribonuclease H (RNase H)酶活性，不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，可以合成长片段从DNA。
本产品中M-MLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200U/μl，用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。
特点：M-MLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达9-13kb的cDNA。该反转录酶的最适反应温度为42-45℃并且在55℃时仍然有很高活性，可以避免普通的M-MLV反转录酶(RNase H-)在37℃反应时的一些不足。
用途：M-MLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA条链的合成。合成的cDNA条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。
来源：该反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达
活性定义：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at37℃. Enzyme activity is assayed in50 mMTris-HCl (pH 8.3),6 mMMgCl2,10 mMDTT,40 mMKCl,0.5 mMdTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP0.4 mMpolyA•oligo(dT)12-18.
纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA条链等的需要。
酶储存溶液：50 mMTris, pH 8.3,100mMNaCl,1 mMEDTA,5 mMDTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。
5×RT buffer：250 mMTris, pH 8.3 at25℃,250 mMKCl,20 mMMgCl2,50 mMDTT。
失活或抑制：70℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对该反转录酶(RNase H-)有抑制作用。
● 使用说明：
cDNA链合成：
1. 0.2ml PCR管中配制模板/引物变性混合液：
Oligo(dT)12-18 primer(50 μM)
or Random primer(25 μM)
or Specific primer(10 μM)
注：* Total RNA 的使用量一般为1 ng-1 μg；mRNA的使用量一般为 10 pg-1 μg。
2.70℃保温 10 分钟后迅速在冰上急冷 2 分钟以上。
注：此步骤是打开RNA的一些比较稳定的二级结构。
3. 离心数秒钟使模板 RNA/引物的变性混合液聚集于离心管底部。
4. 在上述离心管中配制下列反转录反应液。
关键字： 反转录酶_PCR相关_PCR_
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