背景[1-3]
载玻片核酸酶清洗试剂盒用于原位杂交中，去除载玻片的核酸酶，主要由弱酸、DEPC处理水、乙醇等组成。
原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。
为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物。
原位杂交：在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双键分子的特点，应用带有标记的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质）DNA或RNA片段作为核酸探针，与组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片段进行杂交，然后可用放射自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在并定位；用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。
此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
应用[4][5]
用于梅花染色体制片技术优化及基于荧光原位杂交的核型分析研究
对现有梅花染色体制片技术进行改良,并通过制片材料选取,探索梅花的染色体周年性制片技术。首次采用玉米45SrDNA序列作为探针,利用荧光原位杂交(FISH)技术,将探针定位于梅花中期染色上,并基于荧光原位杂交结果进行核型分析。
主要研究结果如下：1、拓展了梅花染色体制片取材类型,除了传统的茎尖取材,还利用梅花未成熟种子、组织培养获得的伸长胚根、一年生实生苗顶端生长点等分生组织,均获得了分散程度高、清晰的染色体制片。
2、经改良的去壁低渗火焰干燥制片法,省略预处理过程,直接进行卡诺低温固定,有效拉伸了染色体长度。这一改良有利于FISH试验结果的显微观察,并提高制片效率。
3、玉米45SrDNA探针在梅花中其染色体中发现有6个信号点,主要分布于第1、3、7号染色体上,不同品种略有差异。信号点主要分布于染色体长臂末端,结合染色体核型参数,推测梅花从进化上看属较原始类型。
荧光原位杂交技术在梅花中的成功探索,为其精确核型分析、基因定位、物理图谱构建等方面的研究,奠定了一定的技术基础,具有较重要的应用价值。
参考文献
[1]Karyotype characterization reveals an up and down of 45S and 5S rDNA sites in Crotalaria(Leguminosae-Papilionoideae)species of the section Hedriocarpae subsection Macrostachyae[J].A.G.Morales,M.L.R.Aguiar-Perecin,M.Mondin.Genetic Resources and Crop Evolution.2012(2)
[2]Localization of 5S and 25S rRNA genes on Somatic and meiotic chromosomes in Capsicum species of chili pepper[J].Jin-Kyung Kwon,Byung-Dong Kim.Molecules and Cells.2009(2)
[3]Molecular cloning of Tulipa fosteriana rDNA and subsequent FISH analysis yields cytogenetic organization of 5S rDNA and 45S rDNA in T.gesneriana and T.fosteriana[J].Hitoshi Mizuochi,Agnieszka Marasek,Keiichi Okazaki.Euphytica.2007(1)
[4]Design,Development,and Use of Molecular Primers and Probes for the Detection of Gluconacetobacter Species in the Pink Sugarcane Mealybug[J].Ingrid H.Franke-Whittle,Michael G.O’Shea,Graham J.Leonard,Lindsay I.Sly.Microbial Ecology.2005(1)
[5]陈晶鑫.梅花染色体制片技术优化及基于荧光原位杂交的核型分析[D].北京林业大学,2013.