背景[1-3]
维生素B3(VB3)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测样本中维生素B3(VB3)的含量。
原理：往预先包被人维生素B3(VB3)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人维生素B3(VB3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
维生素B3(VB3)ELISA试剂盒
操作步骤：
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于维生素B3促进健康/化疗致粒缺状态中性粒细胞生成及其作用机制的研究
通过与粒细胞集落刺激因子（Granulocyte-Colony Stimulating Factor,G-CSF）的比较，研究大剂量维生素B3（Vitamin B3）促进正常大鼠及化疗后骨髓抑制期大鼠中性粒细胞的生成作用并探讨其作用机制，同时进一步明确G-CSF在化疗后骨髓抑制期促进机体中性粒细胞生成的机制是否依赖NAMPT-NAD+-SIRT1信号途径。
方法：1、以正常清洁级SD大鼠为研究对象，灌服Vitamin B3（500mg/kg），在不同的时间点测定大鼠外周血细胞分类计数，验证Vitamin B3促进正常大鼠中性粒细胞生成的合适剂量及所需时间。
2、利用正常大鼠模型，分别于Vitamin B3给药前以及给药后大鼠外周血中性粒细胞明显升高时采集大鼠血清标本，检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+）合成水平的变化；待给药后中性粒细胞明显升高时分离大鼠骨髓单个核细胞，提取其总RNA，逆转录实时荧光定量PCR检测骨髓单个核细胞中G-CSF、粒细胞集落刺激因子受体（Granulocyte colony stimulating factor receptor,G-CSFR）、沉默信息调节因子2相关酶1（Silent mating type information regulation2homolog1,SIRT1）、CCAAT/增强子结合蛋白α（CCAAT-enhancer-binding proteinα,C/EBPα）、CCAAT/增强子结合蛋白β（CCAAT-enhancer-binding proteinβ,C/EBPβ）、CCAAT/增强子结合蛋白ε（CCAAT-enhancer-bindingproteinε,C/EBPε）及尼克酰胺磷酸核糖转移酶（Nicotinamidephosphoribosyltransferase,NAMPT）mRNA的表达并比较其与阴性对照组的表达变化。
3、采用化疗后中性粒细胞减少症大鼠模型，利用正常大鼠实验VitaminB3促进中性粒细胞生成的剂量，观察化疗后中性粒细胞减少症大鼠经同等剂量Vitamin B3处理后是否同样具有促进中性粒细胞生成的作用，并比较其作用机制与大鼠正常状态下的异同。
参考文献
[1]γ-Tocotrienol inhibits lipopolysaccharide-induced interlukin-6 and granulocyte colony-stimulating factor by suppressing C/EBPβand NF-κB in macrophages[J].Yun Wang,Qing Jiang.The Journal of Nutritional Biochemistry.2013(6)
[2]Pro-B acute lymphoblastic leukemia in a patient with severe congenital neutropenia:an unusual form of malignant evolution[J].Jordi Juncà,Fuensanta Millá,Blanca Xicoy,Montse Garcí,a-Caro,Iné,s Rodrí,guez-Herná,ndez,Juan I.Aró,stegui.Leukemia&Lymphoma.2013(10)
[3]Granulocyte-colony Stimulating Factor in Combination with Stem Cell Factor Confers Greater Neuroprotection after Hypoxic–Ischemic Brain Damage in the Neonatal Rats than a Solitary Treatment[J].Desislava Doycheva,Gary Shih,Hank Chen,Richard Applegate,John H.Zhang,Jiping Tang.Translational Stroke Research.2013(2)
[4]C/EBP[epsilon]mediates nicotinamide-enhanced clearance of Staphylococcus aureus in mice[J].Kyme,Pierre,Thoennissen,Nils H,Tseng,Ching Wen,Thoennissen,Gabriela B,Wolf,Andrea J,Shimada,Kenichi,Krug,Utz O,Lee,Kunik,Müller-Tidow,Carsten,Berdel,Wolfgang E,Hardy,W David,Gombart,Adrian F,Koeffler,H Phillip,Liu,George Y.EN.2012(9)
[5]杨湖.维生素B3促进健康/化疗致粒缺状态中性粒细胞生成及其作用机制的研究[D].广西医科大学,2014.