背景[1-3]
植物Β-1,3-葡聚糖酶(Β-1,3 GLUCANASE)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法（ELISA）检测植物样本中Β-1,3-葡聚糖酶(Β-1,3 GLUCANASE)的含量。
实验原理：往预先包被β-1,3-葡聚糖酶（β-1,3-glucanase）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的β-1,3-葡聚糖酶（β-1,3-glucanase）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。
植物Β-1,3-葡聚糖酶(Β-1,3 GLUCANASE)ELISA试剂盒
操作步骤：
1从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
应用[4][5]
用于茶树β-1，3-葡聚糖酶基因cDNA片段的克隆与序列分析研究
从茶树中克隆出β-1，3-葡聚糖酶基因cDNA1369bp连续序列，结果如下：根据茶树叶片生化特点，对克氏—步法分离总RNA的方法做了部分修改，从茶树鲜叶中分离、提取总RNA。
根据已发表的其他植物中β-1，3-葡聚糖酶基因的保守序列，设计一对简并引物，采用RT-PCR技术，从茶树中扩增出366bp的cDNA片段（RTPCR.1）。
将该片段克隆到PGEM-T Easy Vector上进行序列测定和分析，结果表明，此片段核苷酸序列和推导的氨基酸序列与已报道的其他植物β-1，3-葡聚糖酶基因的cDNA相应序列有很高的一致性，认为该PCR特异产物为茶树β-1，3-葡聚糖酶基因的cDNA片段。
根据此片段序列设计特异引物，利用3’RACE获得β-1，3-葡聚糖酶cDNA 3’端1252bp的cDNA片段（3RACE.1），序列分析表明：RTPCR.1 3’端249bp与3RACE.1 5’端为重复序列，3RACE.1的核苷酸序列及其推测的氨基酸序列与拟南芥的β-1，3-葡聚糖酶基因家族的cDNA相应序列同源性为50％-90％，因而本研究从茶树中共克隆出含3’端β-1，3-葡聚糖酶基因的cDNA1369bp的连续序列。
参考文献
[1]A novel flower-specific Arabidopsis gene related to both pathogen-induced and developmentally regulated plantβ-1,3-glucanase genes[J].Gabriele Delp,E.Tapio Palva.Plant Molecular Biology.1999(3)
[2]Molecular cloning,structure and expression of an elicitor-inducible chitinase gene from pine trees[J].Haiguo Wu,Craig S.Echt,Michael P.Popp,John M.Davis*.Plant Molecular Biology.1997(6)
[3]Diversity and genetic differentiation among populations of Indian and Kenyan tea（Camellia sinensis（L.）O.Kuntze）revealed by AFLP markers[J].S.Paul,F.N.Wachira,W.Powell,R.Waugh.TAG Theoretical and Applied Genetics.1997(2)
[4]β-1,3-Glucanase is highly-expressed in laticifers of Hevea brasiliensis[J].Mee-Len Chye,Ka-Yun Cheung.Plant Molecular Biology.1995(2)
[5]王朝霞.茶树β-1，3-葡聚糖酶基因cDNA片段的克隆与序列分析[D].安徽农业大学,2001.