通过电泳技术,可以分离出不同大小和构象的RNA分子,并通过观察条带的数量、大小和形态,可以判断出RNA分子的完整性。而在这个过程中,电泳缓冲液的主要作用就是保持pH,并使溶液具有一定的导电性。TAE(Tris-乙酸缓冲液)和TBE(TRIS-硼酸电泳缓冲液)是比较常用的缓冲液,它们到底有什么区别呢?

TAE(Tris-乙酸缓冲液)
优点:
①对于大于13kb的DNA片段,TAE缓冲液能取得更好的分离效果。
②在TAE缓冲液中,DNA的超螺旋状态在电泳过程中能够更好地保持其真实的相对分子质量。
③适用于回收DNA片段,后续进行酶切反应等
缺点:
缓冲容量小,TAE缓冲液在长时间电泳过程中可能会逐渐失去其pH缓冲能力,导致pH值发生变化。
TBE(TRIS-硼酸电泳缓冲液)
优点:
①缓冲能力相对更强,即使在长时间电泳过程中也能保持pH值的恒定,且不容易导致电泳槽内过热。
②适用于电泳分离较小的片段,如小于1kb的片段。其高分辨率使得不同大小的分子更容易区分,从而提高实验的准确性。
缺点:
含有的硼酸成分,可能会对RNA、DNA的回收效率和后续的酶反应实验产生影响。