红细胞裂解液的使用说明

2025/8/19 13:51:00 作者:云霄

红细胞裂解液是一种含有特殊成分的溶解液,主要用于将红血细胞溶解,使其内部的细胞器、蛋白质和其他细胞组分释放出来。这样一来,研究人员可以更方便地进行细胞内分子的研究和分析。裂解液裂解是一种比较温和且简便易行的红细胞去除方法,它既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。下面分别是针对组织细胞与血液样本的处理方法。

红细胞裂解液

组织细胞

1.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。

2.加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2 min。例如细胞沉淀的体积为1 mL,则加入3-5 mL的红细胞裂解液。本步骤在室温或4℃操作均可。

3.400-500 g离心5 min,弃红色上清。4ºC离心效果更佳。

4.如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5.洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500 g离心2-3 min,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4ºC离心效果更佳。

6.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

血液样本

1.取新鲜抗凝血,400-500 g离心5 min,弃上清。

2.加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2 min。例如细胞沉淀的体积为1 mL,则加入6-10 mL的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。注意:对于鼠的血液,裂解1-2 min已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至4-5 min,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。

3.400-500 g离心5 min,弃红色上清。 4ºC离心效果更佳。

4.如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5.洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500 g离心2-3 min,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4ºC离心效果更佳。

6.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

注意:对于微量或少量的血液样品,可以在步中不进行离心弃上清的操作,直接在第二步中加入10倍血液体积的红细胞裂解液,并在室温或4ºC裂解4-5 min。对于鼠的血液,裂解4-5 min已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10 min,但通常不宜超过15 min,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。

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