背景[1-3]
牛巴氏杆菌(PB)核酸检测试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，设计一对牛巴氏杆菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对牛巴氏杆菌的DNA进行体外扩增检测，用于科研实验中对可疑感染病料的病原学检测。
牛巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的一种牛急性热性传染病，又称牛出血性败血症。该病原体为革兰氏阴性短杆菌，两极浓染，高温和常用消毒剂可灭活。健康牛常携带病菌，应激因素如运输易诱发，通过呼吸道、消化道等传播，潜伏期2-5天 。临床分为败血型、浮肿型及肺炎型，表现为高热、黏膜出血、颈部水肿或胸膜肺炎，水牛多发败血型，黄牛以肺炎型为主，死亡率可达80%-90% 。
牛巴氏杆菌(PB)核酸检测试剂盒
保存条件:-20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融（≤5次）
适用仪器：ABI7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
样本类型：病死或扑杀动物，无菌采集病变部位组织；病牛用无菌注射器吸取全血3~5mL。
保存和运输：采集或处理好的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过3次。
牛巴氏杆菌(PB)核酸检测试剂盒特点优势：
1.特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
2.重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
牛巴氏杆菌(PB)核酸检测试剂盒操作流程：
1.样本处理：组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；咽拭子样品直接取100μL于1.5mL灭菌离心管中。
2.试剂配制：加入预混反应液、酶及模板，离心混匀。
3.扩增检测：运行预设程序（如：95℃预变性2min，95℃15s→60℃30s，45循环），分析Ct值。
结果判读
阳性：检测通道Ct值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线；
阴性：样本检测结果Ct值>40或无Ct值。
应用[4][5]
牛巴氏杆菌(PB)核酸检测试剂盒可以用于牛巴氏杆菌的分离鉴定及黄芩苷对巴氏杆菌肺炎的治疗作用
试验对陕西省3个牛场送检的死犊肺脏组织进行细菌分离鉴定和生物特性分析;并进行药物敏感试验挑选出供试菌株,同时通过体外抑菌试验和最小抑菌浓度(MIC)的测定,筛选出20味中药中对多重耐药菌株抑菌效果好的中药;用多重耐药菌株滴鼻感染并建立小鼠肺炎模型,并用黄芩的主要成分(黄芩苷)进行治疗,来评价其治疗效果。
试验结果主要如下:1.共分离到3株病原菌(P1、P2、P3),经形态观察、生化鉴定、16S r RNA基因测序、特异性基因、荚膜血清型特异性基因鉴定、牛巴氏杆菌(PB)核酸检测试剂盒鉴定,确定临床上分离到3株病原菌均为牛A型多杀性巴氏杆菌,3株菌在相同的条件下,生长规律相似,并都有致病性。2.P3对16种药物均敏感;P1、P2均对β-酰胺类(氨苄西林、头孢噻肟、青霉素、头孢呋辛)、磺胺类(甲氧嘧啶)、喹诺酮类(氧氟沙星)耐药,表明P1、P2是多重耐药菌株。多杀性巴氏杆菌P1、P2、P3对乌梅、透骨草、石榴皮、五味子、黄芩、大黄、艾叶、五倍子等8味中药高度敏感;且黄芩的最小抑菌浓度最小(1.95 mg/m L),抑菌效果最佳。
参考文献
[1]Baicalin ameliorates cigarette smoke-induced airway inflammation in rats by modulating HDAC2/NF-κB/PAI-1 signalling[J].ZHANG H.U.;LIU B.A.O.J.U.N.;JIANG S.H.A.N.;WU J.I.N.F.E.N.G.;QI C.H.U.N.H.U.I.;MOHAMMADTURSUN N.A.B.I.J.A.N.;LI Q.I.U.P.I.N.G.;LI L.U.L.U.;ZHANG H.O.N.G.Y.I.N.G.;SUN J.I.N.G.;DONG J.I.N.G.C.H.E.N.G..Pulmonary Pharmacology&Therapeutics.2021
[2]Baicalin ameliorates;-induced lung inflammation in chicken by inhibiting TLR6-mediated NF-κB signalling[J].Zou M.;Yang L.;Niu L.;Zhao Y.;Sun Y.;Fu Y.;Peng X..British Poultry Science.2021
[3]Baicalin attenuates endometritis in a rabbit model induced by infection with Escherichia coli and Staphylococcus aureus via NF-κB and JNK signaling pathways[J].Y.Miao;;M.Ishfaq;;Y.Liu;;Z.Wu;;J.Wang;;R.Li;;F.Qian;;L.Ding;;J.Li.Domestic Animal Endocrinology.2021
[4]Baicalin suppress growth and virulence-related factors of methicillin-resistant S taphylococcus aureus in vitro and vivo[J].Shouping Zhang;;Bin Hu;;Jingfei Xu;;Qiuxuan Ren;;Zhichen Wang;;Sanhu Wang;;Yongjun Dong;;Guoyu Yang.Microbial Pathogenesis.2020
[5]李贵琴.牛巴氏杆菌的分离鉴定及黄芩苷对巴氏杆菌肺炎的治疗作用[D].西北农林科技大学,2022.