链霉亲和素磁珠在蛋白质分离中的应用

2025/8/20 16:24:09 作者:小满

链酶亲和素磁珠将高纯度单层重组中性链霉亲和素共价偶联到形态规整、粒径均一的超顺磁性聚苯乙烯微球上,该超顺磁性微球具有球形完美,粒径均一、比表面积大等优势,有利于方便、快捷、高效地捕获目标分子以及实现磁性分离,该产品可配套自动化设备进行高通量操作。通过链霉亲和素和生物素之间的高亲和力作用(Kd =10-15),SA亲和素磁珠可与生物素标记的分子,如抗体、蛋白质、多肽、核酸或其他生物素标记的靶分子快速绑定结合,从而达到分离纯化作用。 

链霉亲和素磁珠

免疫沉淀

利用抗原与抗体的特异性结合,将抗体固定在链霉亲和素磁珠上,当含有目标蛋白质的样品与磁珠混合时,抗体就会特异性地捕获目标蛋白质,形成“磁珠 - 抗体 - 目标蛋白”复合物。在外加磁场作用下,复合物被吸附到磁场一侧,从而与其他杂质分离,实现目标蛋白质的分离与富集。例如在细胞信号通路研究中,免疫沉淀是重要手段,链霉亲和素磁珠提升其效能。如研究肿瘤细胞某关键信号通路时,涉及关键信号蛋白 P53 及其相互作用蛋白。科研人员将识别 P53 蛋白的特异性抗体固定于链霉亲和素磁珠,与肿瘤细胞裂解物共孵育,抗体捕获 P53 及其关联蛋白,形成 “磁珠 - 抗体 - 目标蛋白” 复合物。实验表明,相较于传统的免疫沉淀方法,链霉亲和素磁珠免疫沉淀具有更高的灵敏度和特异性,能够更有效地富集低丰度的目标蛋白质,且操作相对简便,大大缩短了实验时间。

亲和纯化

在生物医药产业,重组蛋白制备至关重要,链霉亲和素磁珠主导的亲和纯化是关键流程。基于生物素与链霉亲和素之间的高亲和力特异性结合。将待纯化的蛋白质进行生物素标记,然后与链霉亲和素磁珠混合,标记后的蛋白质会与磁珠上的链霉亲和素紧密结合。通过磁场分离,可将结合了目标蛋白质的磁珠与其他杂质分离,再通过适当的洗脱条件,将目标蛋白质从磁珠上洗脱下来,从而获得高纯度的蛋白质。以重组人胰岛素工业化生产为例,通过基因工程使重组人胰岛素带上生物素标签,再与链霉亲和素磁珠结合。优质链霉亲和素磁珠每毫克结合游离生物素量可达 1200 pmol 以上,能有效从细胞培养上清分离重组人胰岛素,纯化后其纯度可达 95% 以上,为后续研发环节奠定基础。

蛋白质芯片

在疾病早期诊断方面,蛋白质芯片技术因高通量、高灵敏度优势备受关注,链霉亲和素磁珠是核心要素。将链霉亲和素磁珠固定在芯片表面作为捕获元件,生物素标记的蛋白质探针或抗体被固定在磁珠上。当含有目标蛋白质的样品与芯片接触时,目标蛋白质与相应的探针或抗体发生特异性结合,通过检测磁珠上的信号变化来实现对目标蛋白质的定性和定量分析。如心血管疾病早期筛查蛋白质芯片研发项目,科研人员将链霉亲和素磁珠固定于芯片基底,用于结合生物素标记蛋白质探针。采集疑似患者血液样本流经芯片,若含心肌肌钙蛋白 I(cTnI)、脑钠肽(BNP)等标志性蛋白质,会与探针结合触发检测信号。临床研究显示,该芯片能在患者发病初期,血液标志物浓度低至 cTnI 为 0.01 ng/mL 时精准检测异常,较传统诊断方法将诊断窗口期提前 2 - 3 小时。

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