研究背景
环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)是人体细胞内生物活性物质，其含量的异常与许多疾病有关[1]。其中，环磷酸腺苷是第一个被发现的第二信使，通过激活依赖cAMP的蛋白激酶，激活或抑制细胞某些酶，发挥生理功能。它能增强心肌收缩力，扩张外周血管，增加心排血量，扩张冠状动脉，增加心肌供血供氧，保护心肌细胞[2]。基于环磷酸腺苷对于人体健康的重要性，人环磷酸腺苷(cAMP)Elisa试剂盒等分析检测试剂的研发与生产具有重要意义。
检测原理
人环磷酸腺苷(cAMP)Elisa试剂盒采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人cAMP单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的cAMP与单抗结合，加入生物素化的抗人cAMP ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，cAMP浓度与 OD 值成正比，通过绘制标准曲线即可求出标本中cAMP 浓度[3]。
应用研究
以大鼠为实验材料对通窍益智颗粒对血管性痴呆模型大鼠的作用机制进行深入研究。具体地，将60只大鼠随机选取10只作为假手术对照组，其余大鼠以双侧颈总动脉永久结扎法制备血管性痴呆大鼠模型，随机分为模型对照组，尼莫地平6.25 mg/kg阳性对照组和通窍益智颗粒24.8，12.4，6.2 g/kg剂量组，灌胃30 d后，观察大鼠行为学改变，TUNEL法检测海马CA1神经元凋亡率，免疫组织化学法检测即刻早期基因(c-fos)表达，人环磷酸腺苷(cAMP)Elisa试剂盒检测神经元环磷酸腺苷(cAMP)含量，Western Blot检测激酶A(PKA)，环磷酸腺效应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化环磷酸腺苷效应元件结合蛋白(pCREB)的表达。
通过对人环磷酸腺苷(cAMP)Elisa试剂盒检测等结果进行分析，与假手术对照组比较，模型对照组潜伏逃避期明显延长，且穿过原平台次数及游泳时间明显缩短，海马CA1神经元凋亡率和c-fos表达量明显提高，cAMP,PKA和pCREB的蛋白表达水平明显下调(P<0.05)；尼莫地平组和通窍益智颗粒24.8，12.4，6.2 g/kg组大鼠学习记忆能力较模型对照组明显提高，海马CA1神经元凋亡减少，c-fos的表达降低，cAMP含量，PKA及pCREB蛋白水平上调(P<0.05)，其中以通窍益智颗粒24.8 g/kg效果最佳(P<0.05)。也就是说，基于开通玄府法在组方中重用风药组成的通窍益智颗粒，可显著改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力，其机制可能与调控cAMP/PKA信号通路关键因子的表达，减轻神经元凋亡有关[4]。
由上述完整的实验探究过程可知，人环磷酸腺苷(cAMP)Elisa试剂盒多作为检测试剂与其他检测手段结合使用，从而保证得到大量数据，进而对所探究实验进行多方面、多层次的结果表征与分析。
参考文献
[1]许乃禄,何浩明.IDDM患者淋巴细胞内cAMP,cGMP的观察[J].中华内分泌代谢杂志, 1991(3).
[2]李清,岳云,温洪,等.环磷酸腺苷对冠状动脉搭桥术病人血液动力学的影响[J].中华麻醉学杂志, 2004, 24(8):2.DOI:doi:10.3969/j.issn.1004-2814.2013.03.050.
[3]叠氮化钠.人环磷酸腺苷(cAMP)ELISA检测试剂盒说明书[J].
[4]李双阳,王凌雪,蒲玉婷,等.通窍益智颗粒通过cAMP/PKA-CREB信号通路影响血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的研究[J].中药药理与临床, 2020, 36(2):6.DOI:CNKI:SUN:ZYYL.0.2020-02-043.