人多效生长因子(PTN)Elisa试剂盒的检测原理、精度和样品采集

2025/9/18 9:48:55 作者:电离式

介绍

人多效生长因子(PTN)Elisa试剂盒用于定量检测人血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清中的多效生长因子(PTN)浓度。具有高特异性,仅识别天然和重组人 PTN,与家族类似物无交叉反应。

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人多效生长因子(PTN)Elisa试剂盒

检测原理

人多效生长因子(PTN)Elisa试剂盒采用定量夹心酶免疫法,试剂盒中的 96 孔酶标板(12×8 条板)已预包被 PTN 特异性抗体;向孔中加入标准品或样本后,样本中的 PTN 会与板上抗体结合;去除未结合物质后,加入生物素标记的 PTN 特异性抗体;洗涤后再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素,HRP - 亲和素与生物素抗体结合;最后加入底物溶液,显色强度与样本中 PTN 的含量呈正相关,终止反应后测定吸光度(OD 值)即可实现定量[1]。

精度

人多效生长因子(PTN)Elisa试剂盒的检测范围为0.24 ng/ml - 15 ng/ml最低可检测浓度<0.06 ng/ml(最低检测限,LLD,定义为 20 次零标准品 OD 均值加 3 个标准差对应的浓度)对人 PTN 检测灵敏度高、特异性优,与 PTN 类似物无显著交叉反应或干扰。批内精密度(同一次实验)为CV%<8%(3 个已知浓度样本,同板检测 20 次);批间精密度为CV%<10%(3 个已知浓度样本,20 次实验检测)。

样本采集与储存

人多效生长因子(PTN)Elisa试剂盒检测不同的样品,需要经过不同的处理步骤。

血清:使用血清分离管(SST),样本室温凝固 2 小时或 4℃过夜,1000×g 离心 15 分钟,分离血清后立即检测;或分装后 - 20℃/-80℃保存,避免反复冻融。

血浆:用 EDTA 或肝素抗凝,采集后 30 分钟内于 2-8℃下 1000×g 离心 15 分钟,分离血浆后立即检测;或分装后 - 20℃/-80℃保存,解冻后需再次离心再检测,避免反复冻融。

组织匀浆:100 mg 组织用 1×PBS 冲洗,加 1 mL 1×PBS 匀浆后 - 20℃过夜;经 2 次冻融破膜,2-8℃下 5000×g 离心 5 分钟,取上清立即检测;或分装后 - 20℃/-80℃保存,解冻后需再次离心,避免反复冻融。

细胞培养上清:2-8℃下 1000×g 离心 15 分钟去除杂质,立即检测;或分装后 - 20℃/-80℃保存,避免反复冻融[2]。

参考文献

[1]Yu S ,Yi-Fang P ,Wenchao Z , et al.Tumour-associated macrophages secrete pleiotrophin to promote PTPRZ1 signalling in glioblastoma stem cells for tumour growth.[J].Nature communications,2017,8(1):15080.

[2]Di S ,P N P ,P V Y , et al.Pleiotrophin, a multifunctional cytokine and growth factor, induces leukocyte responses through the integrin Mac-1.[J].The Journal of biological chemistry,2017,292(46):18848-18861.

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