背景技术
美拉诺坦 I又称阿法美拉诺肽（Afamelanotide），随着美拉诺坦 I的上市，这条由13个氨基酸组成的线性多肽在药物研究方面势必将发挥出更大的作用。美拉诺坦 I的主要英文名有Melanotan-1、Afamelanotide，作为α-促黑素细胞激素（α-MSH）的人工合成类似物，美拉诺坦 I可以用来治疗红细胞生成性原卟啉症导致的光敏性疾病，目前多数美拉诺坦 I产品标注仅用于科研，暂不用于人体。美拉诺坦 I的分子式是C78H111N21O19，分子量1646.85，具体序列如下：Ac-SYS{Nle}EH{D-Phe} RWGKPV-NH2。传统的固相合成中，树脂的选择会对产品的偶联率以及最终的纯度产生很大的影响。
制备方法[1]
一、Fmoc-Val-氨基树脂的制备
步骤1、称取替代度为0.45mmol/g的Ramage Amide AM resin树脂11.11g(5mmol)加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂30min后，抽干，用DMF洗涤三遍，加入体积比为20％的六氢吡啶DMF溶液，反应5min，再次加入20％的六氢吡啶DMF溶液反应10分钟，中间DMF洗涤一次，反应结束抽干，DMF洗涤3遍。
步骤2、将5.09g的Fmoc-Val-OH、2.02g的HOBT(1-羟基苯并三唑)、2.32ml的DIC(N,N'-二异丙基碳二亚胺)在0℃下溶于DMF中，完全溶解后加入反应柱中室温反应1小时， 采用茚三酮检测法进行检测呈阴性来判断反应进程，反应结束后DMF洗涤三遍，得到Fmoc-Val-氨基树脂。
二、美拉诺坦 I全保护树脂肽的制备
步骤1、将上述Fmoc-Val-氨基树脂中加入体积比为20％的六氢吡啶DMF溶液，反应5min，再次加入20％的六氢吡啶DMF溶液反应10分钟，中间DMF洗涤一次，反应结束抽干，DMF洗涤3遍。
步骤2、将将5.06g的Fmoc-Pro-OH、2.02g的HOBT(1-羟基苯并三唑)、2.32ml的DIC(N,N'-二异丙基碳二亚胺)在0℃下溶于DMF中，完全溶解后加入反应柱中室温反应1小时， 采用茚三酮检测法进行检测呈阴性来判断反应进程，反应结束后DMF洗涤三遍，得到Fmoc-Pro-Val-氨基树脂。
步骤3、按照步骤2方法，依照美拉诺坦 I的序列，依次偶联每一个氨基酸，反应至Ac-Ser(tBu)-OH完成后，DMF洗涤三遍，DCM洗涤三遍，甲醇洗涤三遍，抽干得美拉诺坦 I全保护树脂肽23.89g。
三、美拉诺坦I粗品肽的制备
将美拉诺坦 I全保护树脂肽23.89g放入圆底烧瓶中，在0℃下缓慢加入配置好的250ml裂解液(裂解液采用的试剂配方体积比例为TFA：苯甲硫醚：苯酚：三异丙基硅烷：水＝ 82.5：7.5：5：3：2)缓慢搅拌，低温下反应0.5小时，室温下反应2小时，抽滤得到裂解液，将裂解液缓慢加入2L的无水冰乙醚中并搅拌，过滤分离粗品多肽，冰乙醚洗涤3遍，得到美拉诺坦 I粗品肽8.55g。
四、美拉诺坦 I精品肽的制备
步骤1、将美拉诺坦 I粗品肽溶于100ml纯化水中，用0.45μm的滤膜过滤 , 得粗肽溶液。
步骤2、使用高效液相色谱仪器对美拉诺坦 I粗肽进行纯化：通过DAC-HB50动态轴向压缩柱，流动相A为质量百分浓度0.05％三氟醋酸水溶液，B为质量百分浓度0.05％三氟醋酸乙腈溶液，进行梯度洗脱分离纯化，采用紫外检测器对样品进行检测，分段收集目的峰的肽溶液。
步骤3、经过高效液相纯化得到纯度大于99％的美拉诺坦 I三氟醋酸液体180ml，旋蒸浓缩后得到液体50ml。
步骤4、将色谱柱用去离子水平衡后上样，上样量为50ml，纯度大于99％的美拉诺坦 I三氟醋酸液体，在2％醋酸水溶液体系下洗脱 50min，将收集的目的产物旋转浓缩至80ml，进行预冻干、冻干处理，最终得到美拉诺坦 I精品肽5.33g，收率为32.33％。
参考文献
[1]杭州固拓生物科技有限公司. 一种美拉诺坦I的固相合成法:CN202010353399.7[P]. 2020-10-23.