人白细胞活化黏附因子(ALCAM)Elisa试剂盒是一种用于定量检测人体样本中ALCAM蛋白浓度的实验工具。因其高灵敏度、高特异性的特性，近年来在肿瘤生物学、自身免疫性疾病及神经科学领域展现出重要的应用价值。ALCAM又称CD166，是免疫球蛋白超家族的重要成员，参与细胞黏附、迁移、增殖及免疫应答等关键生理过程[1]。
实验原理
人白细胞活化黏附因子(ALCAM)Elisa试剂盒利用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。首先，在酶标板中预包被ALCAM的特异性捕获抗体。待测样本（如血清、血浆）加入后，ALCAM蛋白被捕获。随后，加入带有生物素标记的检测抗体，形成"捕获抗体-ALCAM-检测抗体"的夹心复合物。接着加入与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的链霉亲和素，它与生物素结合。最后加入TMB显色底物，在HRP催化下产生蓝色，再加入终止液变为黄色。颜色的深浅与样本中ALCAM浓度成正比，通过酶标仪在450nm波长读取吸光度，再与标准曲线对比，即可计算出ALCAM的精确含量。
实验流程
实验开始前，将所有试剂和样本平衡至室温（约20分钟）。操作时根据说明书的设置，在酶标板的标准品孔和样本孔中准确加样。随后，依次加入检测抗体并充分混匀。然后，按照说明书规定的时间和温度（通常为37℃）进行温育。接着进行洗涤以去除未结合物质。加入TMB显色底物后，在37℃避光孵育15-30分钟。最后加入终止液，15分钟内完成吸光度测定。
研究与应用
肿瘤细胞的侵袭与转移是影响患者预后的关键因素。用人白细胞活化黏附因子(ALCAM)Elisa试剂盒检测了56例老年脑膜瘤患者肿瘤组织中的ALCAM水平，提示ALCAM可能通过上调MMP表达来促进细胞外基质降解，从而增强肿瘤的局部浸润能力[3]。这一发现凸显了人白细胞活化黏附因子(ALCAM)Elisa试剂盒在评估肿瘤侵袭潜能方面的临床预测价值。
在ALCAM在LN中的研究进展中，明确指出尿ALCAM（uALCAM）可作为评估LN活动性的无创生物标志物。研究显示，与无肾脏受累的SLE患者、非活动性LN患者及健康对照相比，活动性LN患者的uALCAM浓度显著升高[2]。利用人白细胞活化黏附因子(ALCAM)Elisa试剂盒对尿液样本进行检测，不仅有助于LN的早期诊断，还能实时反映疾病活动度并预测复发风险。
一项涵盖非裔美国人、白种人和亚洲人群的多民族研究证实，uALCAM在区分活动性LN方面优于约1000种其他候选炎症标志物[2]。此外，基线uALCAM水平还可预测LN患者10年后的肾脏不良预后，且对增生性LN（Ⅲ/Ⅳ型）与膜性LN（Ⅴ型）具有良好的鉴别能力[2]。这些发现使人白细胞活化黏附因子(ALCAM)Elisa试剂盒成为肾病领域极具转化潜力的诊断工具。
高质量的重组蛋白是人白细胞活化黏附因子(ALCAM)Elisa试剂盒的核心组件之一。研究者成功构建了ALCAM基因的真核质粒表达载体pcDNA3.1-ALCAM-hFC，并将其转染至HEK293细胞中进行表达。研究采用Protein A磁珠亲和纯化策略，最终获得纯度较高的ALCAM-hFC融合蛋白。SDS-PAGE凝胶电泳结果显示，由于糖基化修饰，目的蛋白实际分子量约为100 kDa，与理论值82.6 kDa存在差异，这恰恰反映了哺乳细胞表达系统在维持蛋白天然构象和翻译后修饰方面的优势[1]。
注意事项
务必严格遵循说明书，包括室温平衡、洗涤等细节，以确保结果准确。收集样本时需避免溶血与高血脂，若不能及时检测应分装冻存于-20℃或-80℃。绝不能反复冻融，操作时请务必穿好实验服、戴好一次性手套和口罩，注意安全防护。
参考文献
[1] 李俊雅, 何婧. 活化白细胞黏附分子蛋白的表达与纯化研究[J]. 医学理论与实践, 2025, 38(19): 3246-3249.
[2] 翁克霞, 李冰. 活化的白细胞黏附分子在狼疮性肾炎中的研究进展[J]. 首都医科大学学报, 2025, 46(1): 150-153.
[3] 刘许昌, 王健. 金属蛋白酶及白细胞活化黏附因子在老年脑膜瘤中表达及与侵袭力的关系[J]. 中国老年学杂志, 2015, 35(21): 6130-6131.