PLGF最初在胎盘组织中被发现，但近年研究证实其在肺、脑、卵巢等多种组织中均有表达，并参与慢性炎症、缺血性损伤及血管重塑等病理过程。有研究发现，PLGF在慢性哮喘大鼠肺组织中表达上调，可用于评估哮喘气道炎症程度，作为筛选哮喘不同进展阶段的生物标志物，并为抗血管生成治疗策略的疗效评价提供定量依据[1]。另有研究发现PLGF在急性脑梗死大鼠脑组织中呈代偿性升高，为评估药物促血管新生作用提供定量指标[2]。同时通心络组大鼠神经功能缺损评分显著改善，海马和皮质神经元损伤减轻，血清和脑组织PLGF表达水平显著升高[2]。这一结果表明，通心络可能通过上调PLGF表达发挥促血管新生和神经保护作用，使药物疗效评价从定性描述走向精确定量。另外PLGF在初老大鼠卵巢中表达下降，与卵巢功能衰退密切相关，检测卵巢组织中PLGF浓度，建立PLGF表达水平与卵巢血管密度之间的量效关系，为阐明左归丸“补肾填精-促血管生成-改善卵巢功能”的作用轴提供关键数据[3]。在这些研究中，大鼠胎盘生长因子(PLGF)ELISA KIT均发挥了关键的定量检测作用。
检测方法
大鼠胎盘生长因子（PLGF）ELISA KIT主要采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）和竞争法（Competitive ELISA），双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)最为常用。试剂盒中的微孔板预先包被了PLGF的特异性捕获抗体，加入含有PLGF的样本（或标准品）孵育，PLGF被捕获抗体固定在板孔中，然后加入生物素（Biotin）标记的检测抗体，形成“捕获抗体-PLGF-检测抗体”的复合物，再加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的链霉亲和素（Streptavidin），利用生物素-亲和素系统高效结合检测抗体，随后加入底物TMB，在HRP催化下变为蓝色，加入终止液（硫酸溶液）后变为黄色，最后在450nm波长下测定吸光度（OD值），PLGF的浓度与OD值成正比。
竞争法 (Competitive ELISA)的原理是预先包被的PLGF抗原会与样本中的PLGF“竞争”结合标准量的检测抗体，因此OD值能间接反映样本中的PLGF含量。首先制作血清，全血室温自然凝固10-20分钟或4℃过夜，然后离心（如3000转/分，20分钟），取上层血清，注意避免溶血。血浆的处理，使用EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合后离心（如2000-3000转/分，20分钟），取上清。接下来进行组织匀浆，取组织块称重，按重量:体积比（如1:9）加入预冷的PBS缓冲液（pH 7.4）进行匀浆。匀浆后离心（如5000转/分，15分钟），取上清备用。样本准备好后应尽快检测。若不能立即使用，可分装后于 -20℃ 或 -80℃ 保存，要避免反复冻融。
操作要点
首先将所有试剂和样本在使用前恢复至室温，并轻轻混匀。其次加样时要避免交叉污染与气泡。通常需要设置空白孔、标准品孔和待测样品孔。操作过程中需要严格按照说明书要求的时间和温度进行孵育。洗涤步骤需确保充分去除未结合的干扰物。最后在加入底物后需避光显色，加入终止液后立即在酶标仪上于450nm波长处测定OD值。绘制标准曲线时，以标准品的浓度为X轴，测得的OD值为Y轴，绘制标准曲线。计算样本浓度时，将样本测得的OD值代入标准曲线方程，计算出样本中的PLGF浓度。若样本经过稀释，需将计算结果乘以稀释倍数。
注意事项
所有试剂盒均严格限定为仅供科研使用（For Research Use Only, RUO），严禁用于临床诊断。样本中不可含有叠氮化钠（NaN₃），因其会抑制HRP酶的活性，导致结果偏低。试剂存储过程中药注意试剂盒中不同组分的保存条件，通常为2-8℃。部分组分可能需要-20℃长期保存。未使用的酶标板条板条应密封并妥善保存，以防受潮。
参考文献
[1] 郑敏辉, 邱琴, 林霞. 胎盘生长因子在慢性哮喘大鼠肺组织中的表达[J]. 武警医学, 2020, 31(12): 1063-1066.
[2] 盖聪, 李澎涛, 孙红梅, 等. 通心络对急性脑梗死大鼠脑组织及胎盘生长因子表达的影响[J]. 中医学报, 2014, 29(11): 1603-1607.
[3] 唐立明, 段恒, 肖彩仙, 等. 左归丸对大鼠卵巢血管生成与胎盘生长因子、肝细胞生长因子及其受体关系的影响[J]. 中国中西医结合杂志, 2022, 42(5): 582-588.