磺酸基-Cy5羧酸是水溶性五甲川吲哚菁类远红/近红外荧光染料，为Cy5的磺化羧酸衍生物，是生物标记、荧光成像与分子检测的核心探针前体。
合成方法
干燥三口瓶中加入0.501g化合物16、0.033g化合物14，加入乙酸酐2mL、吡啶1mL，磁力搅拌，通氮气保护，密封。油浴升温至110℃，保持15分钟，溶液变深蓝，反应完成。停止加热，冷却至室温，加入30mL冷乙酸乙酯，剧烈搅拌，析出深蓝色胶状固体，静置10分钟，过滤，收集蓝色固体，蓝色固体用DCM浸泡洗涤2–3次（每次5mL），DCM会溶解所有PEG载体残留，产物不溶，过滤，保留蓝色固体，真空干燥。得到磺酸基-Cy5羧酸纯品为深蓝色粉末，收率：0.014g（23.7%），纯度：HPLC>98%[1]。
应用
陈爱平就耳后注射地塞米松后药物在局部的分布进行观察，对药物进入内耳的可能途径进行初步探讨。用磺酸基-Cy5羧酸标记地塞米松。豚鼠随机分为两组:耳后注射组和肌肉注射组。Cy5-地塞米松0.5ml进行右耳后和右臀大肌注射，用动物体内可见光成像连续观察120h，评估药物局部代谢的动态变化。Cy5-地塞米松0.5ml进行右耳后和右臀大肌注射，在注射后8h断头处死动物，用动物体内可见光成像观察荧光标记的药物在头颅、颞骨、脏器的分布。Cy5-地塞米松0.5ml进行右耳后和右臀大肌注射，每天一次，连续三天，在第四天断头处死动物，将鼓膜、中耳粘膜、内淋巴囊、耳蜗基底膜等组织铺片，用共聚焦显微镜观察荧光标记的药物在组织的精确分布[2]。
将磺酸基-Cy5羧酸(16.0mg,24.4umol)、TSTU(8.8mg，29.2umol,1.2当量)和DIPEA (15.3uL，87.6 umol,3.6当量)溶解在500uL DMF 中。将溶液在搅拌下放置5分钟，然后加入溶解在500uL硼酸盐缓冲液(2.5M,pH8)和DIPEA(3.2uL,18.4umol)中的胱胺二盐酸盐(8.2mg,36.5umol,1.5当量)。在环境温度下1小时后,加入二硫苏糖醇(6.8mg,43.8mmol,1.8当量),并且将反应介质在环境温度下在搅拌下放置过夜。在减压下除去溶剂,并且用反相半制备HPLC(洗脱液:H2O 0.1%TFA,ACN 0.1%TFA)进行产物纯化。以蓝色粉末的形式获得二磺酸化花菁5.0-SH(7.3mg,42%)[3]。
参考文献
[1] Jiang L L, Dou L F, Li B L. An efficient approach to the synthesis of water-soluble cyanine dyes using poly(ethylene glycol) as a soluble support[J]. Tetrahedron Letters, 2007, 48(33): 5825-5829.
[2] 陈爱平. 耳后注射糖皮质激素治疗内耳疾病的实验研究[D]. 山东:山东大学,2016. DOI:10.7666/d.Y3035950.
[3] 国家科学研究中心,勃艮第大学. 生物相容性模块化四嗪平台:CN201880020928.2[P]. 2019-12-13.