井冈霉素,又称N-[(1S)-(1,4,6/5)-3-羟甲基4,5,6-三羟基-2-环己烯基]、有效霉素、百里达斯等,由6种氨基葡萄糖化合物(称组合A、B、C、D、E、E)组成,其中A、B、E、F约占60%,主要活性成分为A。它们是井冈霉素产生菌的二级代谢产物,井冈霉素产生菌原放线菌链霉力属吸水类群。
井冈霉素为内吸性杀菌剂。主要防治水稻纹枯病,持效期15~20d,耐雨水冲刷。还可防治小粒菌核病,稻曲病,玉米大斑病,玉米穗腐病,玉米、豆类立枯病、白组病,人参、棉花、蔬菜立枯病。为得到高纯的产品并对其生产过程进行控制,需要对井冈霉素的原料药进行纯化,该研究采用了重结晶法纯化井冈霉素,且用硫酸-苯酚法对其含量进行了分析。
纯化方法
重结晶。在锥形瓶中加入井冈霉素原药和一定量的溶剂甲醇,加热至完全溶解,并用折叠滤纸过滤至烧杯中。加入乙酸乙酯至沉淀不再析出,用布氏漏斗抽滤,滤液冲洗锥形瓶。
将滤饼置于真空干燥箱(50℃)中干燥1h左右,再置于装有无水CaCl2的棕色干燥器中干燥30min,即得井冈霉素试样[1]。
多糖测定原理
苯酚-硫酸比色法测定多糖含量是由Dubois等提出的。多糖或寡糖被浓硫酸在适当高温下水解,产生单糖,并迅速脱水成糠醛衍生物,该衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应,在波长490nm处,其吸光度A值与糖浓度C呈线性关系,因此可用比色法测定井冈霉素的含量。
结果
通过对比试验确定了硫酸-苯酚法测定井冈霉素的最佳条件:对照品为无水葡萄糖;苯酚用量5%;苯酚溶液1.0ml,浓硫酸用量5.0ml,反应后静置20min,检测波长490nm,标准曲线的相关系数R为0.9939。在此最佳条件下测定井冈霉素的含量操作简单,准确度高,可靠性强。该法具有简单、快速、无需乡糖纯品和贵控制重仪器等优点,且对水溶性样祥品和非水溶性样品均可测定[1]。
参考文献
[1] 曹晖,王绍云. 井冈霉素的提纯和含量测定研究[J]. 安徽农业科学,2011,39(6):3359-3361. DOI:10.3969/j.issn.0517-6611.2011.06.082.