芴甲氧羰酰基正亮氨酸（Fmoc-Nle-OH）为白色结晶粉末，溶于DMF、DCM等有机溶剂，不溶于水，它是Fmoc固相合成的标准保护氨基酸，用于制备含正亮氨酸的肽类药物，还可用于合成抗肿瘤、抗病毒肽及蛋白类药物。
反应信息
在室温下向芴甲氧羰酰基正亮氨酸(1eq.,1g,2.83mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加DIPEA (3eq.,1.10g,1.48mL,8.49mmol) 、HATU(1.5eq.,1.61g,4.24mmol)和Me2NH(2eq.,2.83mL,5.66mmol),并将所得反应混合物在室温下搅拌60分钟。用EtOAc和饱和NaHCO3水溶液稀释反应混合物。分离各层并用EtOAc萃取水层。用饱和NaHCO3水溶液(4x)、盐水洗涤合并的有机层,经Na2SO4干燥,过滤并浓缩,得到残余物,将其吸收于Et2O中,研磨并过滤。浓缩滤液,得到粗制物,将其通过正相LC(固定相:不规则SiOH,30um,Interchim,40g,液体装载于DCM中,于DCM中的0-10%MeOH)进行纯化,得到残余物,将其与Et2O一起共蒸发,得到固体状N- [(1S)-1-(二甲基氨甲酰基)戊基]氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(868mg,81%)[1]。
中间体20a的制备(具有Fmoc-D-N1e-0H的2-氯三苯甲基氯树脂的加载、Fmoc除去和树脂加载的确定)：将2-氯三苯甲基氯树脂(50.0g,85.0mmol)混悬于DCM(400mL)中,将混悬液搅拌10min,然后倒出溶剂,将树脂用DCM(3x200mL)洗涤。然后将芴甲氧羰酰基正亮氨酸(24.0g,68.0mmol)和DIPEA(96.5mL,552.5mmol)在DCM(120.0mL)中的溶液加入树脂中,将混悬液充氮气,于室温搅拌5min。加入另一份DIPEA(22.7mL,127.5mmol),反应混合物于室温搅拌过夜。倒出反应混合物,将树脂用DCM(3x250mL)洗涤,每次2分钟。将树脂用混合物DCM/MeOH/DIPEA(70:15:15)(2x 250mL)淬灭,每次10分钟。Fmoc基团通过用哌啶/DMF(1:3)(1x300mL)处理树脂5分钟而裂解。然后将树脂排液(1x300mL)15min,然后进行洗涤步骤:DMF(6x250mL,每次2min)、异丙醇(2x250mL,每次2min)和TBMB(6x250mL,每次2min)。将树脂于35℃真空干燥24小时,得到中间体20a(57.8g,加载=1.08mmol/g)[2]。
氮气保护、0℃条件下，向搅拌状态的芴甲氧羰酰基正亮氨酸（1.500g，4.25mmol溶于15mL二氯甲烷）中，依次加入二环己基碳二亚胺（1.752g，8.49mmol）、(S)-3-(2-氟苯基)-2-羟基丙酸叔丁酯（1.02g，4.25mmol）与4-二甲胺基吡啶（0.259g，2.123mmol）。室温搅拌4h，反应液过滤，滤液减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱分离，以石油醚/乙酸乙酯体系（乙酸乙酯体积分数0%~40%梯度洗脱）纯化。合并目标产物组分并减压浓缩，得到(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)己酸(S)-1-叔丁氧基-3-(2-氟苯基)-1-氧代丙-2-基酯固体产物[3]。
参考文献
[1] 节奏制药公司. 用MC4R激动剂治疗肥胖症的方法:CN202380091439.7[P]. 2025-09-30.
[2] 诺华股份有限公司. 脂肪酸及其在与生物分子缀合中的用途:CN201580033910.2[P]. 2017-08-18.
[3] MERCK SHARP & DOHME LLC. MACROCYCLIC PEPTIDES TARGETING KRAS:US2023028277W[P]. 2024-01-25.