MOK抗体是识别MOK（MAPK/MAK/MRK Overlapping Kinase）蛋白的研究工具。MOK属丝氨酸/苏氨酸激酶，也称RAGE-1或STK30。在一项激酶组亚细胞定位研究中，它被用作内源特异性抗体，用于标记MOK的真实定位。
研究把456个带表位标签的激酶构建进表达文库，在HeLa细胞中统一成像。定位检测分两条路径。一是标签抗体识别外源转染蛋白，通量高但标签可能干扰定位。二是内源特异性抗体识别天然蛋白，可避开标签干扰。质谱路线通过细胞器分离和亲和纯化，与显微成像互补。抽检256个质粒显示，37%高表达、58.5%中低表达、4.5%未检出。
MOK抗体属于内源路径。研究用CRISPR/Cas9在MOK终止密码子前敲入3×Flag，细胞组分分离显示MOK富集于MT-CO2标志的线粒体组分，核与胞质仅少量。为排除标签假阳性，改用MOK抗体检测无标签MOK，线粒体定位仍成立。亚线粒体分析中，5 μg/mL Digitonin只穿透质膜，MOK仅弱胞质信号。Triton处理后线粒体定位充分显现。碳酸钠抽提排除膜蛋白可能，最终归入膜间隙蛋白。MOK无经典线粒体定位信号，转运依赖TOM20与TIM23。
抗体特异性被量化。人类蛋白质图谱计划用13993个抗体对12003个蛋白染色，定义30种定位，并将抗体可靠性分为Uncertain、Approved、Supported、Enhanced四档。与高可靠数据比对，178个激酶中101个至少匹配一个主定位，符合度56.7%，比与全部数据比较高近10%。51个激酶与两个定位数据库存在差异。可见内源抗体特异性不足是定位差异因素之一，选用MOK抗体应记录可靠性档次。
实验条件可复用部分，免疫荧光用4%多聚甲醛固定15分钟，0.1% Triton/PBS通透5分钟，2%山羊血清与2% BSA封闭1小时，一抗室温1.5小时或4℃过夜，Alexa Fluor二抗室温避光1小时，抗淬灭封片。免疫印迹用PVDF膜甲醇活化，320 mA湿转90分钟，5%脱脂奶粉封闭1小时，一抗4℃过夜，HRP二抗1小时，ECL显影。标志物包括TOM20、HSP60、MT-CO2和Actin。
判断结果需要注意。其一，激酶活性与功能不绑定：A375细胞敲除MOK后线粒体内嵴减少、耗氧与ATP下降、ROS上升、死亡增加，而回补无激酶活性的MOK2同样能挽回，说明总蛋白MOK抗体才是定位与表达量基准。其二，剪接异构体：线粒体定位由53–103与301–331序列介导，MOK2定位比例高于MOK1，抗体表位需覆盖两种异构体。研究还发现MOK结合ATAD3A，敲减ATAD3A也导致线粒体嵴减少。同时强调，关注的激酶仍需内源水平特异性抗体验证。
参考文献
[1] 张海涛. 蛋白激酶组亚细胞定位图谱绘制与新的线粒体蛋白激酶功能研究[D]. 杭州: 浙江大学, 2020.