肿瘤坏死因子受体（TNFR）属于Ⅰ型跨膜糖蛋白，由胞膜外区、跨膜区和胞内区三部分组成。其中TNFR1几乎可在机体的每一个细胞表达，TNFR2则只在有限的细胞表达，而其活性对疾病更具特异性，被视为治疗2型糖尿病肾病的一个好靶点[1]。TNFR2的基因定位在染色体1p36[3]。膜结合型受体（mTNFR）会在蛋白酶作用下从细胞膜上脱落，裂解成可溶形式sTNF-R1、sTNF-R2释放进血液或组织液[2]。TNF-R2抗体是针对NF-R2（肿瘤坏死因子受体2，又称CD120b或p75）的研究工具，在免疫调节、细胞存活和炎症反应中扮演重要角色。
95例2型糖尿病肾病患者按尿白蛋白排泄率分为无蛋白尿组（28例）、早期蛋白尿组（32例）与临床蛋白尿组（35例），另设45例健康对照，用ELISA检测血清TNFR-1、TNFR-2与MCP-1[1]。TNFR-2随分期逐步升高，对照组高于临床蛋白尿组。基础治疗3个月后回落。若要在同一批样本上把膜受体与脱落位点一并读出，TNF-R2抗体是其重要的检测工具。
在支气管哮喘患儿相关研究中，哮喘急性发作期46例、缓解期31例、健康对照22例，在96孔板每孔加50 μL标本或标准品，再以200 μL抗体室温孵育1 h，洗板3次后加50 μL显色液显色15 min，200 μL终止液终止，450 nm读数[2]。sTNF-R2在急性期为14.32±6.19 ng/mL、对照组4.75±1.68 ng/mL（P<0.01），缓解期仍达11.57±4.78 ng/mL。而TNF-α在缓解期不降，与急性期差异无统计学意义。另外，mTNFR在蛋白酶作用下裂解为sTNFR释放入血，但检测读数只落在血清一侧，TNF-R2抗体可以把另一侧读数也检测出来。
将50例SLE患者与117例健康对照，用PCR-RFLP检测TNFR2第六外显子的基因型与等位基因[3]。196R等位基因的OR为1.96（95%CI 1.17~3.28，P=0.0098），基因型组间χ2=6.23、P=0.044，等位基因组间χ2=6.39、P=0.011。扩增产物242 bp，经NlaIII酶切后，196R/R呈单一条带、196M/M呈133 bp与109 bp两条带、杂合子呈三条带，基因型可直接判读。第六外显子编码的正是单一跨膜区的一小部分，而这一小段恰是mTNFR脱落产生sTNFR的蛋白水解酶作用点，196位精氨酸与蛋氨酸之别可能改变空间结构与酶切效率。基因型与脱落量之间隔着一个蛋白层面，TNF-R2抗体正是打通这一步的试剂。
以上三篇的读数，一篇报pg/mL的血清浓度，一篇报ng/mL的血清浓度，一篇报基因型频率与OR值。同为ELISA的量值也相差甚远，TNFR-2的对照值38.50 pg/mL约合0.0385 ng/mL，而哮喘组sTNF-R2对照值4.75 ng/mL，两者差出约两个数量级，说明跨研究借用绝对浓度前必须先核对标准品与抗体配对。操作层面有现成条件可沿用，采血后及时分离血清、低温保存，同批检测保持孵育温度与时长一致。至于落在膜上的那份受体，变性电泳、固定后免疫组化与天然构象沉淀对表位的要求各不相同，其条件需要由TNF-R2抗体自己去建立。
因此，选择与验证TNF-R2抗体，至少要过四道关。其一是表位归属，TNFR2与TNFR1同属一个家族、一级结构相近，免疫原应避开两者共有的半胱氨酸富集区，并以TNFR1过表达裂解液作交叉反应阴性对照。其二是形式识别，多数商品化抗体的免疫原落在胞外区，若用于膜上受体的检测，须确认它能识别全长mTNFR2而非只认脱落片段。其三是场景复用，脱落位点靠近跨膜区，针对近膜表位的抗体在固定条件下可能失效，免疫印迹、免疫组化与免疫沉淀三处需分别验证。其四是物种与基质，上述三篇的样本分别来自成年人血清与患儿血清，若在链脲佐菌素大鼠等模型中复用，须先确认种属覆盖。
参考文献
[1] 贾丽艳, 曹小会, 胡艳云, 等. TNF-R、MCP-1在2型糖尿病肾病患者不同分期中的表达水平及临床意义分析[J]. 国际检验医学杂志, 2018, 39(16): 2015-2017.
[2] 童夏生, 李晨虹, 方丽, 等. 支气管哮喘患儿血清肿瘤坏死因子α及其可溶性受体1和2的检测及临床意义[J]. 中国儿童保健杂志, 2011, 19(4): 360-363.
[3] 王小飞, 钱绩虎, 鞠少卿, 等. 肿瘤坏死因子受体2基因多态性与SLE易感性的相关性[J]. 临床皮肤科杂志, 2002, 31(12): 746-748.