背景技术
IGF‑1(insulin‑like growth factor‑1)是一类胰岛素样生长因子，也被称为生长调节素C，其化学结构与胰岛素相似，是体内重要的细胞因子之一。IGF-1 LR3(Long R3IGF‑1)是IGF‑1的一个类似物，是将人IGF‑1的第三位谷氨酸(Glu)替换成精氨酸(Arg)，同时在其N端引入13个氨基酸组成融合多肽，这13个氨基酸是由猪生长激素的前11个氨基酸再加上缬氨酸(Val)‑天冬氨酸(Asn)组成，IGF-1 LR3具有与天然IGF‑1几乎相同的二级结构。
目前临床及科学研究中使用的人IGF‑1大多来源于大肠杆菌表达系统，但由于IGF‑1蛋白存在较多的二硫键，不易于正确折叠，蛋白在表达过程中极易形成包涵体，可溶性表达低。有研究尝试在毕赤酵母中表达IGF-1 LR3，但表达量不高，天然IGF‑1在毕赤酵母中的表达还未见报道。综上所述，目前人IGF‑1来源仍然非常有限，不能满足临床及科研的需要，因此开发新的能提高此蛋白的表达策略非常必要。
制备表达
专利CN202310243947.4提供了一种在毕赤酵母中表达人IGF‑1或其类似物IGF-1 LR3的方法。其中，所述表达盒包括以下操作性连接的元件：AOX1启动子，酿酒酵母a‑Factor信号肽编码基因、XynCDBFV基因、人IGF‑1或人IGF-1 LR3基因序列、终止子。其中，在所述酿酒酵母a‑Factor信号肽编码基因与XynCDBFV基因之间包含蛋白酶酶切位点(ENLYFQG或KREAEA)；在所述XynCDBFV基因与所述人IGF‑1或IGF-1 LR3基因序列之间包含linker序列(RSG)和蛋白酶位点；在终止子之前含有His标签序列。
为了提高人IGF‑1或其类似物IGF-1 LR3的重组表达能力，本发明在毕赤酵母中通过融合蛋白促进目的蛋白的表达，本申请在IGF‑1或IGF-1 LR3的N端融合木聚糖酶基因XynCDBFV，实现了XynCDBFV‑IGF‑1或IGF-1 LR3融合蛋白的表达。通过融合蛋白之间设计TEV蛋白酶位点，然后纯化时利用TEV蛋白酶切割实现了融合蛋白的分离，得到具有生物活性的人IGF‑1及IGF-1 LR3蛋白。另外，通过高密度发酵，实现了融合蛋白的高效表达[1]。
参考文献
[1] 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所. 一种在毕赤酵母中表达人IGF-1或其类似物LR3 IGF-1的方法:CN202310243947.4[P]. 2023-05-09.