T4 DNA聚合酶
T4 DNA聚合酶 性质
T4 DNA聚合酶是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以在结合有引物的单链DNA模板上，从5'→3'方向催化DNA合成反应。T4 DNA聚合酶具有3'→5'外切酶活性，但不具有5'→3'外切酶活性。 T4 DNA聚合酶由于同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性，可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4 DNA聚合酶的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高，即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA聚合酶所消化。T4 DNA聚合酶的3'→5'外切酶活性比Klenow Fragment要高约200倍。T4 DNA 聚合酶对 5´→3´ 方向的 DNA 合成起到催化作用，需要使用模板和引物。
缺口填充（无链置换活性）
去除 3’ 突出末端或补平 5’ 突出末端，形成平末端
缺失 5’ —> 3’ 核酸外切酶活性
通过置换合成法标记探针
单链删除后亚克隆
缺口填充（无链置换活性）
去除 3’ 突出末端或补平 5’ 突出末端，形成平末端
缺失 5’ —> 3’ 核酸外切酶活性
通过置换合成法标记探针
单链删除后亚克隆