细胞冻存液

细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中，及时冻存原始细胞是十分重要的。在杂交瘤单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验操作。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败，如果没有原始细胞的冻存，则因为上述的意外而前功尽弃。细胞冻存液的成分明确，无动物源成分，均采用符合临床级或USP级的原料，含低浓度的DMSO；4℃保存，即用即取；适用于间充质干细胞、NK细胞、T细胞等多种细胞，冻存密度范围广（0.5~50×106个细胞/mL），复苏后细胞得率90%以上，细胞活率达85%以上（采用AO/PI荧光染色法测量）；含无菌、内毒素及支原体质控检测。细胞冻存液可用于人源间充质干细胞和免疫细胞的低温冻存保护（-80℃ 到 -196℃）。

1、使用常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞，并计数，确认所需冻存的细胞数量。 

2、将即冻存细胞收集于离心管中，1000 rpm 离心 5 min，收集细胞沉淀，并弃掉上清液。 

3、加入适量的冻存液至离心管中，最后的细胞保存浓度为 5×10⁵ 至 1×10⁷/mL，轻柔混匀细胞，形成细胞混合液。 

4、将细胞混合液按 1~1.5 mL 每管分装于冻存管中。 

5、将冻存管直接置于 -80℃ 保存，可长期保存。