人环磷酸鸟苷(CGMP)ELISA KIT
| 中文名称 | 人环磷酸鸟苷(CGMP)ELISA KIT |
|---|---|
| 中文同义词 | 人环磷酸鸟苷(CGMP)ELISA KIT |
| 英文名称 | Human Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit |
| 英文同义词 | Human Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit |
| CAS号 | |
| 分子式 | |
| 分子量 | 0 |
| EINECS号 | |
| 相关类别 | |
| Mol文件 | Mol File |
| 结构式 |
人环磷酸鸟苷(CGMP)ELISA KIT 性质
竞争法
人环磷酸鸟苷(CGMP)ELISA KIT采用双抗体夹心ELISA法。用抗环磷酸鸟苷(CGMP)抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的环磷酸鸟苷(CGMP)会与包被抗体结合，游离的成分被洗去，然后依次加入生物素化的抗环磷酸鸟苷(CGMP)抗体，HRP-链霉亲和素结合物,最后加入单组份TMB底物液。TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，环磷酸鸟苷(CGMP)浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中环磷酸鸟苷(CGMP)的浓度。
人人环磷酸鸟苷(CGMP)ELISA KIT用于体外定量检测血清、血浆或其它相关生物液体中环磷酸鸟苷(CGMP)的含量。本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人环磷酸鸟苷(cGMP)水平。用纯化的环磷酸鸟苷(cGMP)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入环磷酸鸟苷(cGMP)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的环磷酸鸟苷(cGMP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中环磷酸鸟苷(cGMP)含量。1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。可检测样本中人的cGMP，且与其类似物无明显交叉反应。环磷酸鸟苷（cGMP）是一种环状核苷酸，来源于三磷酸鸟苷（GTP）。它最可能的作用机制是激活细胞内的蛋白激酶，以应对膜渗透性肽类激素与细胞外表面的结合。鸟苷酸环化酶（GC）催化cGMP的合成。这种酶将GTP转换为cGMP。肽类激素，如心房钠尿素激活膜结合的GC，而可溶性GC（sGC）通常被一氧化氮激活以刺激cGMP的合成。sGC可被ODQ（1H-[1,2,4]噁二唑并[4,3-a]喹喔啉-1-酮）抑制。cGMP是离子通道传导性、糖原分解和细胞凋亡的常见调节剂。它还能放松平滑肌组织。在血管中，血管平滑肌的放松导致血管扩张和血流量增加。cGMP是眼睛中光传导的二级信使。在哺乳动物眼睛的光感受器中，光的存在激活了磷酸二酯酶，使cGMP降解。光感受器中的钠离子通道是cGMP门控的，因此cGMP的降解导致钠离子通道关闭，从而导致光感受器质膜的超极化，最终导致视觉信息被传送到大脑。cGMP还被视为介导了皮质第五层锥体细胞顶端树突对semaphorin-3A（Sema3a）的吸引力的开启。这种吸引是由存在于顶端树突中的可溶性鸟苷酸环化酶（SGC）水平增加所介导的。SGC产生cGMP，导致一连串的化学激活，从而导致对Sema3a的吸引。轴突中没有SGC会导致Sema3a的排斥。这一策略确保了锥体神经元的结构极化，并发生在胚胎发育期。cGMP和cAMP一样，在嗅觉受体接受气味输入时被合成。cGMP产生缓慢，比cAMP具有更持久的生命力，这使它与细胞对气味刺激的长期反应有关，如长期痴呆。