A549-RFP

A549-RFP细胞是通过慢病毒转染A549细胞的方式使之携带RFP基因，为稳定转染RFP的细胞，但随细胞传代次数的增加，其RFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为1ug/mL嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含2ug/mL嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5ug/mL。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可再次加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/mL嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。上皮细胞样(多角形，不规则形或梭形)1.尽量吸干净T25瓶原培养基；2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4.将培养瓶放入37度培养箱消化；5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）肺腺癌；男性；58岁；RFP标记贴壁细胞