人非小细胞肺癌细胞+RFP；A549+RFP

                                                           人非小细胞肺癌细胞+RFP；A549+RFP
产品信息：

人非小细胞肺癌细胞A549+RFP是一种经过基因改造的细胞系，源自人非小细胞肺癌细胞A549，通过转染红色荧光蛋白（RFP）基因，使其稳定表达红色荧光。这种细胞系在癌症研究、药物筛选和活体成像等领域具有重要应用价值。以下是其详细说明、培养操作和

特性：

特性/操作   详细信息

细胞来源与特性   源自人非小细胞肺癌细胞A549，通过慢病毒转染稳定表达红色荧光蛋白（RFP）。

细胞呈上皮细胞样，多角形，贴壁生长。

培养基   Ham's F-12K培养基或DMEM培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（PS）。

培养条件   37℃、5% CO、饱和湿度。

传代方法   细胞密度达80%-90%时进行传代。

用0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变圆脱落即终止消化。

离心收集细胞，按1:2至1:4比例分瓶传代。

冻存与复苏   冻存液为90%FBS+10%DMSO，程序降温后液氮保存。

复苏时37℃水浴快速解冻，加入完全培养基稀释DMSO，离心后重悬接种。

应用领域   用于癌症研究、药物筛选、活体成像等。

A549+RFP细胞系因其稳定的红色荧光表达和良好的生长特性，成为研究非小细胞肺癌的重要工具。在培养过程中，需注意维持适宜的培养条件和操作规范，以确保细胞的正常生长和荧光表达。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。