小鼠白介素2(IL-2)ELISA KIT

双抗体夹心法本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)的含量。小鼠本试剂盒应采用双抗体夹心法测定标本中小鼠白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)水平。用纯化的白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)含量。1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。可检测样本中小鼠的IL-2，且与其类似物无明显交叉反应。白细胞介素-2（IL-2）是一种白细胞介素，是免疫系统中的一种细胞因子信号分子。它是一种15.5-16kDa的蛋白质，可调节负责免疫的白细胞（白细胞，通常是淋巴细胞）的活动。IL-2通过与淋巴细胞表达的IL-2受体结合而发挥其作用。IL-2的主要来源是活化的CD4+T细胞和活化的CD8+T细。IL-2是一个细胞因子家族的成员，其每个成员都有一个四条α螺旋束；该家族还包括IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21。IL-2通过IL-2受体发出信号，这是一个由三条链组成的复合物，被称为α、β和γ。伽马链是所有家族成员共有的。成熟的小鼠白细胞介素-2（IL-2）与人和大鼠IL-2的氨基酸（a.a.）序列分别有56%和73%的一致性。它在含有多谷氨酰胺的N端区域显示出品系的异质性。小鼠和人类IL-2表现出跨物种的活性。IL-2的受体由三个亚单位组成，它们以不同的预形成的复合物存在于细胞表面。55kDa的IL-2Rα对IL-2具有特异性，并以低亲和力结合。75kDa的IL-2Rβ，也是IL-15受体的一个组成部分，以中等亲和力结合IL-2。64kDa的共同γ链γc/IL-2Rγ，与IL-4、-7、-9、-15和-21的受体共享，不与IL-2独立相互作用。配体结合后，信号转导由IL-2Rβ和γc共同完成。它驱动静止的T细胞增殖并诱导IL-2和IL-2Rα合成。它通过促进Fas诱导的幼稚型CD4+T细胞的死亡而不是激活的CD4+记忆淋巴细胞的死亡来促进T细胞的稳态。IL-2在调节性T细胞的扩增和维持中起着核心作用，尽管它抑制了Th17极化细胞的发展。