THP-1细胞
THP-1细胞 性质
THP-1细胞是1980年Tsuchiya等人建立的人单核细胞白血病细胞系，是从一名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血中分离得到的，THP-1细胞被广泛用于单核细胞和巨噬细胞相关的机制、信号通路以及营养和药物运输等研究，是研究免疫和炎症的理想工具。
细胞生长状态：THP-1细胞是悬浮生长并形成松散的团块，几乎没有细胞附着，细胞倍增时间为60-70h。
形态：在Wright-giemsa染色涂片中，即有圆形细胞也有一些多边形细胞，直径为12-14μM，细胞中有少量嗜碱性的胞浆，胞浆中含有少量嗜蓝颗粒和少量液泡，细胞核呈锯齿状，形状不规则。准备工作：15/50mL的离心管，马克笔，培养瓶（T25）/培养皿（直径60mm），RPMI 1640培养基，胎牛血清（FBS），双抗（PS），酒精瓶（消毒杀菌）+酒精棉球，离心管/试剂管架子，移液枪，tip头（1000/200ul）。
（1）首先用酒精棉球擦拭细胞房的实验台子，将我们所需要上述物品放入台子里，并用紫外照30min，此时打开水浴锅42℃。
（2）照完紫外后，将保存在-80℃或者液氮中的细胞拿出用一次手套包住并迅速放入42℃水浴锅中，一般在1min中内完全解冻。
（3）通过传递箱将细胞拿进细胞房，打开照明，打开细胞台子的玻璃门，用酒精喷洒手和细胞冻存管将细胞拿进台子里，进行细胞复苏。
（4）配置培养基：以50ml离心管为例：RPMI 1640培养基+10% 胎牛血清+ 1%双抗：500ul双抗（PS）+5mL(10%)/7.5(15%)胎牛血清（FBS）+RPMI 1640培养基加至50mL，并做好标记（培养基成分+配置时间+个人标记（名字））。
（5）首先准备一只15ml离心管，将细胞冻存管内的细胞以及冻存液吸取至离心管中，加入2mL 步骤
（4）中配置好的RPMI 1640培养基，700~800rpm ，低速离心5min。
（6）离心的时间，准备T25培养瓶或者直径60mm的培养皿做好标记（细胞名称+复苏时间+姓名）。离心完成后，弃上清，吸取1ml新鲜完全培养基重悬细胞。
（7）吸取2-3ml新鲜培养基至准备好培养瓶或者培养皿中，再将1ml细胞重悬液吸取至T25瓶或培养皿，“十字”摇匀细胞。
（8）用酒精喷洒后，将细胞放入37℃，5%CO2培养箱中培养2-3天观察细胞状态。注意：细胞在偏酸性环境中生长更快，当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，比较适合细胞生长。THP-1细胞为悬浮细胞且具有低密度依赖性，一般超过10^6/ml传代，比例一般为1:3/1:4，因此目前利用的两种传代方式：
(1) 半换液传代（不用离心）:吸取培养瓶或者培养皿中的细胞移至新的培养瓶或者培养皿中，补足培养基2-3ml。
(2) 传统的离心传代：将瓶子或皿中的细胞吸取至15mL离心管中，700-800rpm，离心5min；弃上清，吸取2-3ml新鲜培养基重悬细胞，分至新的培养瓶或者培养皿中并补足培养基2-3ml。THP-1细胞来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，有分化为多种巨噬细胞的能力，是各领域研究常用的细胞系之一。1. THP-1细胞在偏酸性环境中生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可；
2. THP-1细胞培养液中需添加β-巯基乙醇（细胞培养级别），若不添加，可能会对细胞状态造成影响；
3. THP-1细胞比较难复苏，复苏初期细胞生长缓慢且会有部分细胞破碎，出现黑色细胞碎片，少量细胞碎片不影响细胞正常生长，待细胞恢复正常生长速度后可用半换液法稀释碎片。
THP-1对血清质量较为敏感，建议您使用优质胎牛血清进行培养，或选择订购cell-box澳洲标准级胎牛血清（货号为AUS-01S-02）培养。1. THP-1细胞贴壁问题？
答：1.THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况，THP-1细胞被发现自发贴壁[3]，可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞；2.当贴壁细胞比例高于20%，建议排查细胞生长培养箱温度及CO2浓度、培养基成分（营养体系的酸碱性）、以及培养瓶可用非TC处理过的培养瓶，不利于细胞贴壁；3.更换血清可能会导致THP-1细胞很容易分化成为巨噬细胞。
2. THP-1细胞聚团问题？
答：1.THP-1细胞在密度较稀时，有少量细胞聚团属于正常现象，不建议将聚团的细胞吹散，等细胞密度增高时，细胞会自然分散开；2.细胞密度高时，聚团细胞比例高于30%时，并且细胞团呈糜烂状，细胞之间界限不清，胞体质膜有溃烂感，这种情况下的细胞聚团是异常的，建议排查营养体系的酸碱性、培养箱环境问题、更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。
3. THP-1细胞复苏不起来？
答：1.THP-1细胞对冻存条件比较敏感，复苏存活率受冻存体系、冻存和复苏流程影响比较大；2.THP-1细胞冻存的密度过低，由于THP-1是悬浮细胞，更易受到冻存影响，建议加大冻存密度，大约200万-300万/mL为宜，以提高复苏存活率。
4. 培养基里一定要加β-巯基乙醇（ β-mercaptoethanol）吗？
答：β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响；当细胞密度过大但需要维持细胞状态时，可适当增加β-巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。
细胞生长状态：THP-1细胞是悬浮生长并形成松散的团块，几乎没有细胞附着，细胞倍增时间为60-70h。
形态：在Wright-giemsa染色涂片中，即有圆形细胞也有一些多边形细胞，直径为12-14μM，细胞中有少量嗜碱性的胞浆，胞浆中含有少量嗜蓝颗粒和少量液泡，细胞核呈锯齿状，形状不规则。准备工作：15/50mL的离心管，马克笔，培养瓶（T25）/培养皿（直径60mm），RPMI 1640培养基，胎牛血清（FBS），双抗（PS），酒精瓶（消毒杀菌）+酒精棉球，离心管/试剂管架子，移液枪，tip头（1000/200ul）。
（1）首先用酒精棉球擦拭细胞房的实验台子，将我们所需要上述物品放入台子里，并用紫外照30min，此时打开水浴锅42℃。
（2）照完紫外后，将保存在-80℃或者液氮中的细胞拿出用一次手套包住并迅速放入42℃水浴锅中，一般在1min中内完全解冻。
（3）通过传递箱将细胞拿进细胞房，打开照明，打开细胞台子的玻璃门，用酒精喷洒手和细胞冻存管将细胞拿进台子里，进行细胞复苏。
（4）配置培养基：以50ml离心管为例：RPMI 1640培养基+10% 胎牛血清+ 1%双抗：500ul双抗（PS）+5mL(10%)/7.5(15%)胎牛血清（FBS）+RPMI 1640培养基加至50mL，并做好标记（培养基成分+配置时间+个人标记（名字））。
（5）首先准备一只15ml离心管，将细胞冻存管内的细胞以及冻存液吸取至离心管中，加入2mL 步骤
（4）中配置好的RPMI 1640培养基，700~800rpm ，低速离心5min。
（6）离心的时间，准备T25培养瓶或者直径60mm的培养皿做好标记（细胞名称+复苏时间+姓名）。离心完成后，弃上清，吸取1ml新鲜完全培养基重悬细胞。
（7）吸取2-3ml新鲜培养基至准备好培养瓶或者培养皿中，再将1ml细胞重悬液吸取至T25瓶或培养皿，“十字”摇匀细胞。
（8）用酒精喷洒后，将细胞放入37℃，5%CO2培养箱中培养2-3天观察细胞状态。注意：细胞在偏酸性环境中生长更快，当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，比较适合细胞生长。THP-1细胞为悬浮细胞且具有低密度依赖性，一般超过10^6/ml传代，比例一般为1:3/1:4，因此目前利用的两种传代方式：
(1) 半换液传代（不用离心）:吸取培养瓶或者培养皿中的细胞移至新的培养瓶或者培养皿中，补足培养基2-3ml。
(2) 传统的离心传代：将瓶子或皿中的细胞吸取至15mL离心管中，700-800rpm，离心5min；弃上清，吸取2-3ml新鲜培养基重悬细胞，分至新的培养瓶或者培养皿中并补足培养基2-3ml。THP-1细胞来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，有分化为多种巨噬细胞的能力，是各领域研究常用的细胞系之一。1. THP-1细胞在偏酸性环境中生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可；
2. THP-1细胞培养液中需添加β-巯基乙醇（细胞培养级别），若不添加，可能会对细胞状态造成影响；
3. THP-1细胞比较难复苏，复苏初期细胞生长缓慢且会有部分细胞破碎，出现黑色细胞碎片，少量细胞碎片不影响细胞正常生长，待细胞恢复正常生长速度后可用半换液法稀释碎片。
THP-1对血清质量较为敏感，建议您使用优质胎牛血清进行培养，或选择订购cell-box澳洲标准级胎牛血清（货号为AUS-01S-02）培养。1. THP-1细胞贴壁问题？
答：1.THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况，THP-1细胞被发现自发贴壁[3]，可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞；2.当贴壁细胞比例高于20%，建议排查细胞生长培养箱温度及CO2浓度、培养基成分（营养体系的酸碱性）、以及培养瓶可用非TC处理过的培养瓶，不利于细胞贴壁；3.更换血清可能会导致THP-1细胞很容易分化成为巨噬细胞。
2. THP-1细胞聚团问题？
答：1.THP-1细胞在密度较稀时，有少量细胞聚团属于正常现象，不建议将聚团的细胞吹散，等细胞密度增高时，细胞会自然分散开；2.细胞密度高时，聚团细胞比例高于30%时，并且细胞团呈糜烂状，细胞之间界限不清，胞体质膜有溃烂感，这种情况下的细胞聚团是异常的，建议排查营养体系的酸碱性、培养箱环境问题、更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。
3. THP-1细胞复苏不起来？
答：1.THP-1细胞对冻存条件比较敏感，复苏存活率受冻存体系、冻存和复苏流程影响比较大；2.THP-1细胞冻存的密度过低，由于THP-1是悬浮细胞，更易受到冻存影响，建议加大冻存密度，大约200万-300万/mL为宜，以提高复苏存活率。
4. 培养基里一定要加β-巯基乙醇（ β-mercaptoethanol）吗？
答：β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响；当细胞密度过大但需要维持细胞状态时，可适当增加β-巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。