MC3T3-E1 SUBCLONE 14小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14

MC3T3-E1 SUBCLONE 14小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14是从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆。从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。MC3T3亚克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亚克隆14（ATCC CRL-2594）在抗坏血酸和3到4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。

MC3T3-E1细胞在含有抗坏血酸的培养基中生长后，选择亚克隆用于高或低成骨细胞分化和矿化，获得了MC3T3-E1 Subclone 4、MC3T3-E1 Subclone 14、MC3T3-E1 Subclone 24、MC3T3-E1 Subclone 30等多个亚系。MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14在抗坏血酸和3-4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化，10天后形成一个矿化良好的细胞外基质(ECM)。MC3T3-E1 Subclone 24和MC3T3-E1 Subclone 30在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化，不形成ECM，可以作为MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14的阴性对照。矿化的亚克隆选择的表达作为成骨细胞标记的mRNA及唾液酸糖蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)和甲状旁腺激素/甲状旁腺激素相关蛋白受体的mRNA。高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出相似数量的胶原质，表达可比较的基本水平的mRNA编码Osf2/Cbfa1（成骨细胞相关转录因子）。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亚克隆形成与骨类似的形成小骨的编织骨，低分化细胞只是产生纤维组织。这些细胞系是研究体外成骨细胞分化的好模型，尤其是ECM信号，它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类似。

1.尽量吸干净T25瓶原培养基；

2.加3-4ml常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；

4.将培养瓶放入37度培养箱消化；

5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；

6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；

7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；

8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养。

成纤维细胞样(梭形或多角形)1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）颅顶骨前骨细胞；自发永生；C57BL/6；1日龄内贴壁细胞