Hacat（人永生化角质形成细胞）

该细胞是第一株永生化的表皮细胞，来源于62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤组织，经体外培养后自发转化为永生化的人角质细胞。该细胞保留了正常皮肤细胞的特性和功能，角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白表达阳性。该细胞因其在体外分化和增殖的高能力而被用于人表皮细胞角化的研究。此外，它也被广泛应用于皮肤生物学、免疫学、药物毒性研究、皮肤疾病研究、化妆品和药物测试等领域。
复苏人永生化表皮细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。人男性，62岁皮肤90%DMEM+10%FBS贴壁生长（Adherent）62岁（62Years）上皮样细胞，贴壁生长

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

正常（Normal）

1）准备人永生化表皮细胞基础培养基(GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。

2）人永生化表皮细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）人永生化表皮细胞冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。