人角膜内皮细胞

人角膜内皮细胞是指人类眼球中位于角膜表面的一层细胞，具有重要的生理功能。它们可以分泌一些生物活性物质，如神经生长因子、血管生成素等，参与调节眼压、促进角膜上皮细胞的修复和再生等过程。

角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不同，中央部最薄。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层，角膜内皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响人角膜内皮细胞可参与调节眼压、促进角膜上皮细胞的修复和再生等过程；其还被广泛应用于医学和生物学研究中，用于研究角膜疾病、药物筛选等方面。1) 组织来源于人的正常眼组织。
2) 细胞鉴定：NSE免疫荧光染色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5) 细胞生长方式：铺路石样，不规则细胞，贴壁培养。a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

1:2传代

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

人眼角膜组织人角膜内皮细胞采用混合胶原酶消化结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。贴壁生长铺路石细胞样，不规则细胞样