人表面活性蛋白A(SP-A)ELISA KIT

双抗体夹心法人表面活性蛋白A(SP-A)ELISA KIT用于测定血清，血浆及相关液体样本中表面活性蛋白A(SP-A)相关含量或活性。人试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被表面活性蛋白A(SP-A)捕获抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的表面活性蛋白A(SP-A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

1、取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。

2、分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。10个标准孔,1个空白对照

3、标准品的稀释:准备小试管6只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0号标准品。

4、加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

5、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

6、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒弃去,如此重复5次,拍干。

7、加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。

8、温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。

9、洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。

10、显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。

11、终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。

12、读板:在450nm波长读取各孔的OD值。

本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中表面活性蛋白A(SP-A)的含量。1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。可检测样本中人的SP-A，且与其类似物无明显交叉反应。表面活性蛋白A(SP-A)也被称为表面活性剂蛋白A1（SP-A1），是一种由SP-A基因编码的蛋白质。它主要在肺部的II型肺泡细胞中合成，是被称为肺部表面活性剂的脂类和蛋白质复合物的一部分。这种复合物的功能是降低肺泡的表面张力，防止肺泡在呼气时塌陷。表面活性剂的蛋白质成分有助于调节先天免疫反应和炎症过程。SP-A1是C型凝集素亚家族的一个成员，被称为集束蛋白。与SP-A2一起，它们是肺部表面活性剂最丰富的蛋白质。SP-A1与一些微生物表面的碳水化合物结合，有助于防御呼吸道病原体。