猪细胞系的传代培养需要遵循一定的步骤和注意事项，具体方法可能因细胞类型而异。以下是详细流程：
一、传代前准备：
1、器材与试剂
准备T25培养瓶、胰酶（含0.25%EDTA）、完全培养基（如MEM+10%FBS+1%双抗）。
超净台需紫外消毒40分钟，器材火焰灭菌。
2、细胞状态判断
贴壁细胞需汇合度达80%左右，显微镜下观察细胞形态正常（无空泡化或颗粒增多）。
二、传代操作步骤：
1、消化处理
吸弃旧培养基，PBS润洗2-3次后加入胰酶（T25瓶加2ml），37℃消化2分钟（时间依细胞状态调整）。
轻拍培养瓶确认细胞脱落，立即加入完全培养基终止消化。
2、细胞分装
吹打制成单细胞悬液，1000r/min离心10分钟，弃上清后重悬。
按1:2比例分装至新培养瓶（T25瓶加5-6ml培养基）。
三、培养与观察：
1、培养条件
置于5% CO₂、37℃培养箱，湿度70%-80%。
首次换液在24小时后，后续每2-3天换液。
2、注意事项
运输后脱落的细胞需离心回收，但运输用培养基不可继续使用。
冻存细胞建议三管复苏至一个T25瓶以提高存活率。
四、通用原则：
1、选择合适的培养基和血清：确保使用适合该细胞系的培养基和血清，避免使用过期或长时间存放的培养基。
2、维持稳定的培养条件：保持培养温度（37℃）、气体环境（5% CO₂）和湿度。
3、定期观察细胞状态：通过显微镜观察细胞的生长状态，确保细胞处于指数增长期进行传代。
4、避免污染：所有操作应在无菌条件下进行，使用无菌工具和材料。
5、合理控制传代比例：根据细胞的生长速度和密度调整传代比例，避免细胞过密或过稀。
6、注意细胞形态和生长速度：细胞传代后应观察其形态是否正常，生长速度是否符合预期。
通过遵循这些步骤和原则，可以有效进行猪细胞系的传代培养，确保细胞的健康和实验的顺利进行。