要判断细胞处于生长周期的哪个阶段,主要依据细胞周期各时期的特征性事件和分子变化,并通过实验技术进行检测。以下是常用的判断方法:
一、基于DNA含量分析
流式细胞术(PI染色法):通过碘化丙啶(PI)等DNA结合染料标记细胞,检测DNA含量。G0/G1期细胞为2N(单倍体DNA量),S期为2N-4N(DNA复制中),G2/M期为4N(DNA复制完成)。
EdU/BrdU标记法:在S期掺入胸腺嘧啶类似物(如EdU或BrdU),通过抗体或点击化学法检测DNA复制活性,精确定位S期细胞。
二、基于周期蛋白或标志物检测
Western Blot/免疫荧光:检测周期蛋白(如Cyclin D1、CDK2、P21)或磷酸化组蛋白H3(M期标志物)的表达水平,间接反映细胞周期阻滞或推进。
荧光蛋白报告系统:通过荧光标记周期蛋白,实现活细胞实时观察周期变化。

三、同步化实验
通过药物或饥饿法将细胞同步于特定阶段(如G1期、S期、M期),再释放并检测其进入下一阶段的时间,推断周期进程。例如:
血清饥饿法:同步G1期;
胸苷阻断法:同步S期;
诺考达唑:同步M期。
四、其他方法
同位素标记法:用³H-TdR标记S期细胞,追踪其进入后续阶段的时间。
细胞成像技术:如FUCCI系统,通过荧光信号动态显示周期变化。
核心方法总结:
快速检测:流式细胞术(PI染色)或EdU/BrdU标记法;
分子机制研究:Western Blot/免疫荧光检测周期蛋白;
动态观察:荧光报告系统或同步化实验。
根据实验需求选择合适方法,流式细胞术和EdU标记法最常用且高效。