研究背景
炎症调控在元生动物中的进化机制尚不清楚。本研究以虾作为模型，通过血浆蛋白质组学鉴定MANF为LPS诱导的血浆蛋白，其在虾血细胞中抑制ERK磷酸化和Dorsal表达，发挥抗炎作用。
相关研究发表于The Journal of Immunology，DOI：10.4049/jimmunol.2100595。
研究需求
本研究需验证虾MANF的抗炎功能及其机制，包括检测LPS诱导下血浆MANF水平变化、重组MANF对虾血细胞ROS产生和炎症相关基因表达的影响，以及MANF通过RPTP调控ERK通路的作用。
技术挑战
制备高亲和力MANF单克隆抗体需解决噬菌体库筛选的特异性和亲和力问题；ELISA检测需确保捕获和检测抗体的配对灵敏度和重复性；免疫印迹和共沉淀实验需优化对照设置以验证蛋白相互作用。
定制解决方案
抗体/蛋白开发策略：重组MANF作为免疫原，通过噬菌体库筛选制备单克隆抗体，蛋白A纯化，获得高亲和力mAb如R4P1-C3、R4P1-H5等。
实验流程：免疫印迹使用R4P1-H5检测MANF水平，稀释度根据标准曲线优化；ELISA采用R4P1-C3捕获和HRP偶联R4P1-H5检测，适用于血浆样本定量。
验证手段：阳性对照为重组MANF，阴性对照为rEGFP；敲降RPTP验证MANF对ERK抑制依赖性；免疫荧光共定位确认RPTP在细胞膜定位。
附加支持：提供SDS-PAGE纯度报告和ELISA标准曲线，确保批次一致性；建议复现时使用LPS诱导模型验证抗体特异性。
对研究成果的贡献与影响
通过噬菌体库筛选制备单克隆抗体，研究证实虾MANF为LPS诱导血浆蛋白，重组MANF处理抑制虾血细胞ROS产生和炎症基因表达；MANF与RPTP结合抑制ERK磷酸化，提供MANF在元生动物中调控免疫和代谢的机制解释，对理解炎症进化具有意义。
关于我们
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