Sulfo-CY5.5-COOH、Sulfo-CY5.5-NHS、Sulfo-CY5.5-NH₂是科研中常用的近红外荧光标记试剂，三者共享磺化 Cy5.5 荧光核心，却因末端活性基团不同，在反应特性、适用场景与操作难度上差异显著。本文从共性、差异、选择逻辑三方面科普，帮你快速匹配实验需求，解决试剂选择与应用难题。
一、三大试剂的核心共性
三者均以磺化 Cy5.5 为荧光母体，磺酸基团赋予优异水溶性，可直接溶于 PBS 等生物缓冲液，无需有机溶剂助溶。激发 / 发射波长约 678/706 nm，处于近红外 “组织穿透窗口”，背景干扰低、成像深度大，适配细胞、组织与活体成像。荧光亮度高、光稳定性强，对生理 pH 不敏感，标记后不影响生物分子活性，是生物标记与示踪的通用近红外工具。
二、关键差异性与核心信息
Sulfo-CY5.5-COOH（磺化 Cy5.5 - 羧基）
1. 活性基团：末端羧基（-COOH），需经 EDC/NHS 活化后，才能与伯胺分子偶联。
2. 操作特点：两步反应，需额外活化步骤，适合有经验的科研人员，可灵活调控反应条件。
3. 适配实验：标记氨基化蛋白、多肽、核酸；构建定制化荧光探针；纳米材料表面功能化。
4. 解决痛点：传统羧基染料水溶性差、易聚集，磺化修饰后实现水相稳定反应，避免样本损伤。
Sulfo-CY5.5-NHS（磺化 Cy5.5-NHS 酯）
1. 活性基团：预活化 NHS 酯，可直接与伯胺（-NH₂）反应，生成稳定酰胺键。
2. 操作特点：一步偶联，无需活化，操作简便、效率高，适合新手与高通量实验。
3. 适配实验：抗体、重组蛋白、酶的快速标记；流式细胞术、免疫荧光、Western blot 检测；活体靶向成像。
4. 解决痛点：传统活性酯水溶性差、需有机溶剂，磺化后直接水相反应，减少蛋白变性与非特异性吸附。
Sulfo-CY5.5-NH₂（磺化 Cy5.5 - 氨基）
1. 活性基团：末端氨基（-NH₂），可与羧基、NHS 酯、醛基等亲电基团偶联。
2. 操作特点：反向标记工具，填补羧基分子无法用 NHS 酯标记的空白，反应条件温和。
3. 适配实验：标记羧基化蛋白、多肽、小分子；羧基修饰纳米颗粒、聚合物的功能化；生物正交反应构建探针。
4. 解决痛点：传统标记试剂仅能标记氨基分子，氨基染料实现羧基靶向标记，拓展应用范围。
三、实验选择逻辑与避坑指南
· 标记氨基蛋白 / 抗体 / 多肽：优先选 Sulfo-CY5.5-NHS，一步反应、效率高，适合快速标记与高通量实验。
· 标记羧基分子 / 材料：选 Sulfo-CY5.5-NH₂，实现反向偶联，解决羧基靶向标记难题。
· 定制化探针 / 复杂反应：选 Sulfo-CY5.5-COOH，灵活调控活化与偶联条件，适配特殊实验需求。
· 新手 / 高通量：首选 NHS 酯，操作简单、成功率高；有经验 / 定制化：选 COOH；反向标记：选 NH₂。
综上，三者各有侧重，核心差异在于活性基团与反应方向。根据目标分子官能团、实验复杂度与操作经验选择，可大幅提升标记效率与数据可靠性，避免试剂错配导致的实验失败。
限科学研究使用，严格禁止用于人体实验、临床诊断、临床治疗及其他非科研用途。新维创生物相关试剂均遵循科研用途标准生产与质检。
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