一、产品概述
由艾美捷代理Bethyl推出的兔抗人磷酸化RPA32（S33）多克隆抗体（货号：A300-246A），特异性识别RPA复合物中32 kDa亚基（RPA2）在丝氨酸33位点的单磷酸化修饰。RPA32的S33磷酸化是细胞周期依赖性调控事件，与S期进程及DNA损伤应答密切相关。该抗体经严格验证适用于蛋白免疫印迹检测，是研究RPA磷酸化动态调控和DNA代谢调控机制的特异性工具。
二、产品规格与质量参数
项目 | 规格
靶标 | RPA32 磷酸化（Ser33）
验证种属 | 人类
宿主/克隆性 | 兔多克隆（Whole IgG）
免疫原 | 人RPA2蛋白（NP_002937）第33位磷酸化丝氨酸周围序列对应的单磷酸化合成肽
纯化方式 | 抗原亲和纯化（固定化多肽柱）
浓度 | 1000 µg/mL（A280法测定，1 mg/mL IgG吸光系数1.4）
缓冲体系 | Tris-柠檬酸-磷酸盐缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮化钠（防腐剂）
储存条件 | 2~8°C（请勿冷冻）
有效期 | 自收货之日起1年
三、应用与推荐稀释比例
应用体系 | 推荐稀释比例 | 关键操作备注
蛋白免疫印迹（WB） | 1:10,000 ~ 1:25,000 | 封闭液/抗体稀释液：5% Milk-TBST；一抗孵育过夜（4°C）
WB（细胞裂解液直接检测） | 按WB范围 | 二抗推荐抗兔IgG重+轻链抗体（如A120-101P）
*注：本品目前仅验证适用于WB应用，其他应用体系需用户自行优化验证。*
四、靶点生物学背景
RPA（复制蛋白A）是一个异源三聚体复合物（RPA70/RPA32/RPA14），在DNA代谢中发挥多重核心功能：
DNA错配修复（MMR）：与MSH2、MLH1、PCNA及DNA聚合酶δ协同完成修复。
DNA损伤应答：RPA32亚基在S期进入及DNA损伤发生后，被ATM、ATR、DNA-PK等激酶磷酸化，S33位点是cdc2家族激酶在细胞周期调控中修饰的关键位点之一。
磷酸化功能的位点差异性：相较于S4/S8双磷酸化（主要响应DNA损伤），S33磷酸化更侧重于细胞周期依赖性调控，其动态变化反映复制胁迫及检查点激活状态。
五、别名
REPA2；replication factor A protein 2；replication protein A 32 kDa subunit；replication protein A 34 kDa subunit；RF-A protein 2；RP-A p32；RP-A p34；RPA32
六、使用与储存注意事项
避免反复冻融：本品为液体形式，请于2~8°C持续保存，切勿冷冻。
防腐剂提示：缓冲液含0.09%叠氮化钠，进行活细胞实验或体内应用前请透析去除。
S33磷酸化检测要点：
-S33磷酸化水平在细胞周期中呈动态变化，建议使用同步化细胞（如血清饥饿释放或双胸腺嘧啶阻断）进行时间梯度实验以观测调控趋势。
-推荐使用磷酸酶抑制剂（如Na₃VO₄、β-甘油磷酸盐）裂解液制备样本，以维持磷酸化状态。
阳性对照推荐：血清刺激后释放进入S期的同步化HeLa细胞裂解液，或经ATR激活剂（如羟基脲）处理的细胞样本。
与S4/S8抗体的区别：本品特异识别S33单磷酸化位点，与识别S4/S8双磷酸化的抗体在检测谱上互补，建议根据实验目的（细胞周期调控 vs. 损伤应答）选用相应工具。
*本手册信息基于出厂批次验证数据，具体实验条件可能因样本类型及实验室环境而异，建议用户根据实际体系进行预实验优化。