一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl推出的亲和纯化的兔抗人TFEB（转录因子EB）多克隆抗体（货号：A303-673A），特异性识别人TFEB蛋白C端区域（第426~476位氨基酸）。TFEB是MiT/TFE家族转录因子的核心成员，作为溶酶体生物发生和自噬通路的主调控因子，同时在免疫应答中发挥重要功能。该抗体经严格验证适用于免疫沉淀及蛋白免疫印迹检测，是研究溶酶体稳态、自噬调控及免疫信号通路的可靠工具。

二、产品规格与质量参数

项目 | 规格

靶标| TFEB（转录因子EB）

验证种属| 小鼠、人类

宿主/克隆性| 兔多克隆（Whole IgG）

免疫原| 人TFEB蛋白（NP_009093.1）C端第426~476位氨基酸区域对应的重组表位肽段

纯化方式| 抗原亲和纯化（固定化表位特异性支持物）

浓度| 1000 µg/mL（A280法测定，1 mg/mL IgG吸光系数1.4）

缓冲体系| Tris-柠檬酸-磷酸盐缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮化钠（防腐剂）

储存条件| 2~8°C（请勿冷冻）

有效期| 自收货之日起1年

三、应用与推荐稀释比例

应用体系 | 推荐稀释/使用浓度 | 关键操作备注

蛋白免疫印迹（WB）| 1:2,000 ~ 1:25,000 | 封闭液/抗体稀释液：5% Milk-TBST；一抗孵育过夜（4°C）

WB（细胞裂解液直接检测）| 按WB范围 | 二抗推荐抗兔IgG重+轻链抗体（如A120-101P）

WB（IP后检测）| 按WB范围 | 二抗推荐抗兔IgG轻链HRP偶联物，封闭液中加5%正常猪血清以减少重链干扰

免疫沉淀（IP）| 6 µg/mg 总蛋白裂解液 | 每mg裂解物使用6 µg抗体

四、靶点生物学背景

TFEB（转录因子EB）属于MiT/TFE家族（成员包括TFEB、TFE3、MITF等），通过识别并结合DNA上的特定调控序列，调控多种细胞过程：

溶酶体生物发生与自噬调控：TFEB是溶酶体基因表达的中枢调控因子。其通过识别CLEAR-box序列（5'-GTCACGTGAC-3'），激活溶酶体相关基因（包括溶酶体水解酶、膜蛋白及自噬相关基因）的表达，在细胞营养感应和清除受损细胞器过程中发挥核心作用。

免疫调控功能：在活化的CD4+ T细胞中，TFEB与TFE3协同激活CD40L的表达，参与T细胞依赖性抗体应答和胸腺依赖性体液免疫。

DNA结合与二聚化：TFEB以同源二聚体或与TFE3、MITF形成异源二聚体的方式，结合E-box序列（3'-CANNTG-5'）及免疫球蛋白增强子中的gamma-E3 box亚型，实现转录调控的多样性。

五、别名

ALPHATFEB；BHLHE35；class E basic helix-loop-helix protein 35；T-cell transcription factor EB；TCFEB；transcription factor EB

六、使用与储存注意事项

避免反复冻融：本品为液体形式，请于2~8°C持续保存，切勿冷冻。

防腐剂提示：缓冲液含0.09%叠氮化钠，进行活细胞实验或体内应用前请透析去除。

分子量与条带观察：TFEB分子量约为55 kDa，但受磷酸化修饰影响，WB中可能观察到迁移率改变（多条带或条带上移），属正常现象。

亚细胞定位提示：TFEB在营养充足条件下主要定位于细胞质，在溶酶体应激或营养缺乏时发生去磷酸化并转位至细胞核。建议实验前根据研究目的进行相应处理（如饥饿诱导）。

阳性对照推荐：经溶酶体抑制剂（如氯喹、巴弗洛霉素A1）或氨基酸饥饿处理的HeLa或MEF细胞裂解液可作为WB阳性对照。

*本手册信息基于出厂批次验证数据，具体实验条件可能因样本类型及实验室环境而异，建议用户根据实际体系进行预实验优化。