一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl推出的兔抗人磷酸化KAP-1（S824）多克隆抗体（货号：A300-767A），特异性识别KAP-1（KRAB相关蛋白1，亦称TRIM28）在丝氨酸824位点的磷酸化修饰。KAP-1作为KRAB锌指转录抑制因子的核心共抑制因子，在染色质重塑、转录调控及DNA损伤应答中发挥关键作用，其S824磷酸化是ATM/ATR介导的DNA损伤信号通路的重要标志事件。该抗体经严格验证，适用于免疫细胞化学、免疫荧光、免疫组织化学、免疫沉淀及蛋白免疫印迹等多种应用，是研究转录调控与基因组稳定性维持机制的多功能工具。

二、产品规格与质量参数

项目 | 规格

靶标| KAP-1 磷酸化（Ser824）

验证种属| 小鼠、人类

宿主/克隆性| 兔多克隆（Whole IgG）

免疫原| 人KAP-1蛋白（NP_005753.1）第824位磷酸化丝氨酸周围序列对应的合成磷酸化肽段

纯化方式| 抗原亲和纯化（固定化磷酸化表位特异性支持物）

浓度| 200 µg/mL（A280法测定，1 mg/mL IgG吸光系数1.4）

缓冲体系| Tris缓冲生理盐水（TBS），含0.1% BSA（稳定剂）及0.09%叠氮化钠（防腐剂）

储存条件| 2~8°C（请勿冷冻）

有效期| 自收货之日起1年

三、应用与推荐稀释比例

应用体系 | 推荐稀释/使用浓度 | 关键操作备注

免疫细胞化学（ICC）| 1:200 ~ 1:1,000 | 适用于固定细胞的常规免疫染色

免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF）| 1:200 ~ 1:1,000 | 适用于荧光标记的免疫细胞染色

免疫组织化学（IHC）| 1:100 ~ 1:500 | 推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复（适用于FFPE切片）

免疫沉淀（IP）| 6 µg/mg 总蛋白裂解液 | 每mg裂解物使用6 µg抗体

蛋白免疫印迹（WB）| 1:2,000 ~ 1:10,000 | 封闭液/抗体稀释液：5% Milk-TBST；一抗孵育过夜（4°C）

WB（细胞裂解液直接检测）| 按WB范围 | 二抗推荐抗兔IgG重+轻链抗体（如A120-101P）

WB（IP后检测）| 按WB范围 | 二抗推荐抗兔IgG轻链HRP偶联物，封闭液中加5%正常猪血清以减少重链干扰

四、靶点生物学背景

KAP-1（KRAB相关蛋白1，基因名TRIM28）属于TRIM/RBCC家族成员，包含RING指结构域、B-box结构域及α螺旋卷曲螺旋区，作为多功能支架蛋白参与多个关键生物学过程：

转录共抑制：KAP-1通过与KRAB锌指转录抑制因子的KRAB结构域互作，招募组蛋白修饰酶及染色质重塑复合物（如NuRD、SETDB1等），介导基因沉默。

DNA损伤应答：在DNA双链断裂发生后，KAP-1的S824位点被ATM/ATR激酶磷酸化，该磷酸化事件是染色质松弛和损伤信号传递的重要步骤，参与调节下游修复蛋白的可及性。

SUMO化与泛素化调控：KAP-1兼具E3 SUMO连接酶和E3泛素连接酶活性，通过其RING结构域介导底物修饰，参与多种细胞应激响应。

五、别名

E3 SUMO-protein ligase TRIM28；KAP1；KAP-1；KRAB [Kruppel-associated box domain]-associated protein 1；KRAB-associated protein 1；KRAB-interacting protein 1；KRIP-1；nuclear corepressor KAP-1；PPP1R157；protein phosphatase 1, regulatory subunit 157；RING finger protein 96；RING-type E3 ubiquitin transferase TIF1-beta；RNF96；TF1B；TIF1B；TIF1-beta；transcription intermediary factor 1-beta；transcriptional intermediary factor 1-beta；Tripartite motif-containing protein 28

六、使用与储存注意事项

避免反复冻融：本品为液体形式，请于2~8°C持续保存，切勿冷冻。

防腐剂提示：缓冲液含0.09%叠氮化钠，进行活细胞实验或体内应用前请透析去除。

磷酸化信号检测要点：样本制备时推荐添加磷酸酶抑制剂（如Na₃VO₄、β-甘油磷酸盐）以维持磷酸化状态；S824磷酸化在DNA损伤诱导后迅速升高，建议使用电离辐射（如γ射线）或化疗药物（如喜树碱、依托泊苷）处理的细胞作为阳性对照。

多应用兼容性提示：本品已在ICC-IF、IHC、IP及WB多个平台完成验证，建议各应用首次使用时在推荐范围内进行梯度优化。

分子量提示：KAP-1分子量约为88~100 kDa，磷酸化修饰可能导致WB条带迁移率变化。

*本手册信息基于出厂批次验证数据，具体实验条件可能因样本类型及实验室环境而异，建议用户根据实际体系进行预实验优化。