1. 产品概述
由艾美捷代理BPS Biosciences推出的重组人p53（细胞肿瘤抗原p53）全长蛋白（GST标签）（货号：40511），覆盖氨基酸2–393（完整ORF）。构建体N端融合GST标签和TEV蛋白酶切割位点，经亲和层析纯化。该产品适用于蛋白质-DNA结合研究、转录激活功能分析、蛋白-蛋白互作及肿瘤抑制机制研究等场景。
项目 | 规格
构建体 | GST-TEV-p53(2–393端)
标签 | N端GST标签
宿主/表达系统 | Sf9昆虫细胞
分子量 | 70 kDa（含GST标签）
纯度 | ≥82%
剂型 | 水相缓冲液
保存稳定性 | -80°C下至少6个月
2. 背景与功能
p53是人体内最重要的肿瘤抑制因子之一，被誉为“基因组守护者”。在DNA损伤、氧化应激或癌基因异常激活等压力信号下，p53被稳定并激活，作为转录因子结合靶基因启动子中的特定响应元件，转录激活下游基因表达，介导DNA修复、细胞周期阻滞、衰老和细胞凋亡等应激反应。
p53的失活是肿瘤发生最常见的分子事件之一——超过50%的人类肿瘤携带TP53基因突变。突变型p53不仅丧失抑癌功能，还可能获得促癌功能（功能获得性突变），促进肿瘤侵袭和耐药。因此，p53通路的重激活策略（如MDM2抑制剂、p53突变体再激活剂）是肿瘤药物研发的重要方向。
3. 产品设计与质量控制
3.1 构建体设计
全长序列：覆盖氨基酸2–393（不含N端甲硫氨酸），保留完整的DNA结合域（DBD，100–300位）、四聚化结构域（325–356位）和C端调控区（363–393位），确保蛋白具备天然转录因子活性。
GST标签设计：N端GST标签（约26 kDa）增强融合蛋白的溶解性，利于亲和纯化。标签后附带TEV蛋白酶切割位点——使用TEV蛋白酶（BPS Bioscience #50308）切割后，可去除GST标签，获得无标签的天然p53蛋白，避免标签对DNA结合或蛋白互作的潜在干扰。这是本产品区别于普通GST融合蛋白的核心设计。
Sf9表达系统：昆虫细胞表达确保p53的正确折叠和翻译后修饰。
3.2 纯度
SDS-PAGE鉴定纯度≥82%，主要条带为70 kDa（p53 44 kDa + GST标签26 kDa）。如有更高纯度需求，建议在TEV切割后二次纯化去除GST。
3.3 缓冲体系
组成为40 mM Tris-HCl（pH 8.0）、110 mM NaCl、2.2 mM KCl、0.04% Tween-20、3 mM DTT、20%甘油及可变浓度谷胱甘肽。DTT维持p53中多个半胱氨酸残基的还原状态（DNA结合域含Cys176、Cys238等重要锌配位残基）；Tween-20防止蛋白聚集；甘油支持长期低温保存。
4. 使用与保存指南
4.1 操作步骤
1. 冰上解冻，轻柔混匀（严禁涡旋振荡——p53对剪切力敏感）；
2. 解冻后快速离心（10,000×g，10秒）收集管壁液滴；
3. 按单次用量分装，液氮速冻后转回-80°C长期保存；
4. 避免反复冻融（每轮冻融活性损失明显）。
4.2 应用建议
TEV标签切除：如需获得无标签p53，将蛋白与TEV蛋白酶（#50308）按酶:底物≈1:50–1:100（w/w）比例混合，4°C反应过夜或室温2–4小时。切割后可通过谷胱甘肽琼脂糖去除GST标签和未切割融合蛋白，获得纯化无标签p53。
DNA结合活性检测（EMSA）：使用p53共识结合序列（5′-RRRCWWGYYY-3′）标记探针，与p53蛋白孵育后进行电泳迁移率实验。建议在反应缓冲液中加入适量锌离子（ZnCl₂，终浓度50–100 µM）以稳定DNA结合域的锌指结构。
蛋白-蛋白互作（GST pull-down）：利用N端GST标签与谷胱甘肽琼脂糖珠结合，捕获互作蛋白（如MDM2、p300、PCAF等p53调控因子）。
转录激活功能分析：将p53与含p53响应元件（如p21启动子片段）的报告质粒共转染p53-null细胞系，检测荧光素酶活性以评估p53的转录激活功能。
抑制剂筛选：针对干扰p53-MDM2相互作用的化合物，建立竞争结合体系（GST-p53固定+MDM2+梯度抑制剂），检测MDM2结合量的减少。
5. 注意事项
运输与接收：干冰运输，到货后立即存入-80°C。避免存放于自动除霜冰箱。
TEV切割时机：建议根据下游实验需求决定是否切除GST——如需进行无标签p53的精确分子量分析（质谱）或避免标签对抗体识别的干扰，建议切除；如仅需pull-down实验，保留GST标签更便捷。
锌离子补充：p53的DNA结合域依赖锌离子维持正确构象，实验中建议额外补充ZnCl₂（50–100 µM）以确保DNA结合活性。
谷胱甘肽干扰：缓冲液中可变浓度的谷胱甘肽可能干扰某些检测（如含巯基的荧光探针），若需彻底去除，可通过脱盐柱更换缓冲液。
安全性：仅供研究用途（Research Use Only），遵循标准实验室规范。
6. 参考文献
1. Kastan, M.B., et al., Canc. Res. 1991; 51: 6304-6311.
2. Ryan, K.M., et al., Curr. Opin. Cell Biol. 13(3): 332-337.